Microscopia confocal da córnea ao longo da vida

A microscopia confocal da córnea é um dos métodos modernos de pesquisa; ela permite o monitoramento intravital da córnea com visualização do tecido no nível celular e microestrutural.

Este método, devido ao desenho original do microscópio e seu alto poder de resolução, permite a visualização do tecido corneano vivo, a medição da espessura de cada uma de suas camadas e a avaliação do grau de distúrbios morfológicos.

O objetivo da microscopia confocal da córnea

Caracterizar as alterações morfológicas da córnea que ocorrem em diversas doenças inflamatórias e distróficas, bem como em decorrência de intervenções cirúrgicas e exposição à CL.

Dados do exame morfológico são necessários para avaliar a gravidade do processo patológico, a eficácia do tratamento e para determinar as táticas de manejo do paciente.

Indicações para o procedimento

• Doenças inflamatórias da córnea ( ceratite ).
• Doenças distróficas da córnea ( ceratocone, distrofia de Fuchs, etc.).
• Síndrome do olho seco.
• Condições após intervenções cirúrgicas na córnea ( transplante penetrante de córnea, cirurgias ceratorefrativas).
• Condições associadas ao uso de lentes de contato.

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Preparação

Este exame pode ser realizado sem o uso de anestésicos. Uma gota de líquido de imersão é colocada na lente objetiva do microscópio confocal. Isso elimina o contato direto da lente com a córnea e minimiza o risco de danos ao epitélio.

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Técnica microscopia confocal da córnea

O estudo é realizado com um microscópio confocal ConfoScan 4 (Nider) com ampliação de 500 vezes. O dispositivo permite o exame da córnea em toda a sua espessura.

O tamanho da área examinada é de 440 × 330 μm, e a espessura da camada de varredura é de 5 μm. A lente com uma gota de gel é levada até a córnea até que ela toque e é instalada de forma que a espessura da camada de líquido de imersão seja de 2 mm. O design do dispositivo permite o exame da córnea na zona central e em suas áreas paracentrais.

Contra-indicações para o procedimento

Uma contraindicação relativa é irritação ocular grave devido a um processo inflamatório agudo.

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Desempenho normal

Imagem morfológica normal da córnea

O epitélio anterior é composto por 5 a 6 camadas de células. A espessura média de todo o epitélio é de aproximadamente 50 µm. De acordo com a estrutura morfológica, distinguem-se as seguintes camadas (de dentro para fora): células basais, células em forma de furador e superficiais.

• A camada mais interna (basal) é representada por células pequenas, densas e cilíndricas, sem núcleo visível. Os limites das células basais são claros e brilhantes.
• A camada intermediária consiste em 2 a 3 camadas de células espinhosas (aladas) com invaginações profundas nas quais as protuberâncias das células vizinhas estão inseridas. Microscopicamente, os limites das células são claramente distinguíveis, e os núcleos podem não estar definidos ou ser pouco claros.
• A camada superficial do epitélio é representada por uma ou duas camadas de células poligonais com limites bem definidos e densidade homogênea. Os núcleos são geralmente mais brilhantes que o citoplasma, no qual também se distingue um anel escuro perinuclear.

Entre as células da camada superficial, distinguem-se as células claras e escuras. O aumento da refletividade das células epiteliais indica uma diminuição da sua taxa metabólica e o início da sua descamação.

A membrana de Bowman é uma estrutura transparente que não reflete luz, por isso normalmente é impossível visualizá-la com microscopia confocal.

O plexo nervoso subbasal está localizado sob a membrana de Bowman. Normalmente, as fibras nervosas aparecem como faixas brilhantes paralelas sobre um fundo escuro, em contato umas com as outras. A refletividade pode ser irregular ao longo da fibra.

O estroma corneano ocupa de 80 a 90% da espessura da córnea e é composto por componentes celulares e extracelulares. Os principais elementos celulares do estroma são os ceratócitos, que constituem aproximadamente 5% do volume.

Uma imagem microscópica típica do estroma inclui vários corpos ovais irregulares e brilhantes (núcleos de ceratócitos) que se encontram na espessura de uma matriz transparente cinza-escura ou preta. Normalmente, a visualização de estruturas extracelulares é impossível devido à sua transparência. O estroma pode ser condicionalmente dividido em subcamadas: anterior (localizada diretamente abaixo da membrana de Bowman e compõe 10% da espessura do estroma), ântero-média, média e posterior.

A densidade média de ceratócitos é maior no estroma anterior, diminuindo gradualmente em direção às camadas posteriores. A densidade de células do estroma anterior é quase duas vezes maior que a das células do estroma posterior (se a densidade de células do estroma anterior for considerada 100%, a densidade de células do estroma posterior será de cerca de 53,7%). No estroma anterior, os núcleos dos ceratócitos têm formato arredondado, em forma de feijão, enquanto no estroma posterior são ovais e mais alongados.

Os núcleos dos ceratócitos podem variar em brilho. A diferente capacidade de refletir a luz depende do seu estado metabólico. Células mais brilhantes são consideradas ceratócitos ativados (células de "estresse"), cuja atividade visa manter a homeostase interna da córnea. Nos campos normal e visual, são encontradas células ativadas isoladas.

As fibras nervosas no estroma corneano anterior são visualizadas como faixas homogêneas brilhantes, frequentemente formando bifurcações.

A membrana de Descemet é normalmente transparente e não é visualizada pela microscopia confocal.

O epitélio posterior é uma monocamada de células planas hexagonais ou poligonais com uma superfície uniformemente clara contra um fundo de limites intercelulares escuros e claros.

O dispositivo tem a capacidade de calcular manualmente ou automaticamente a densidade celular, sua área e coeficiente de variabilidade.

Alterações patológicas na estrutura da córnea

O ceratocone é caracterizado por alterações significativas no epitélio anterior e no estroma da córnea.

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