13c Teste da urease: preparação, resultados, positivo, negativo

Desde a descoberta da bactéria Helicobacter pylori associada à gastrite crônica e às úlceras gástricas e duodenais, métodos diagnósticos foram desenvolvidos, entre eles o teste da urease, que permite detectar esses microrganismos em um paciente específico, confirmar seu envolvimento no desenvolvimento de doenças gastrointestinais e prescrever um tratamento eficaz.

Enzima urease como biomarcador de infecção por Helicobacter

A bactéria H. pylori se protege do ambiente ácido no lúmen do estômago de duas maneiras. Primeiro, ao danificar a membrana mucosa com seus flagelos, os microrganismos atingem suas camadas inferiores, até as células epiteliais, onde o pH é mais alto (ou seja, a acidez é menor). Segundo, as bactérias neutralizam o ácido sintetizando grandes quantidades da metaloenzima urease, ou ureia amido-hidrolase, de alto peso molecular e atividade catalítica.

O uso da urease no diagnóstico de Helicobacter é possível devido não apenas à atividade citoplasmática desta enzima, mas também à interação externa com as células do hospedeiro.

Sob a ação da urease, a ureia gástrica é decomposta em nitreto de hidrogênio (amônia) e dióxido de carbono (dióxido de carbono). Esses compostos reagem com o ácido clorídrico no suco gástrico e criam uma zona de acidez neutra ao redor do H. pylori, além de auxiliar o metabolismo das células bacterianas.

É por isso que a urease é o fator mais importante na colonização de H. pylori na mucosa gástrica humana, e a detecção da atividade ureolítica é considerada um biomarcador da virulência desta bactéria, que os gastroenterologistas – por meio da realização de um teste de urease – usam para diagnosticar a infecção por Helicobacter, bem como para monitorar os resultados da destruição induzida por medicamentos (erradicação) de bactérias.

O diagnóstico de H. pylori inclui testes invasivos e não invasivos, dependendo da necessidade ou não de exame endoscópico do estômago (fibrogastroduodenoscopia). O teste invasivo é o teste rápido da urease ou teste expresso da urease (TUR), que requer a coleta de amostras de tecido (biópsia). O teste respiratório com ureia 13C (TUB-13C) é o teste não invasivo mais comum.

Vale ressaltar que o diagnóstico não invasivo de H. pylori pode ser realizado por meio de exame de sangue para anticorpos (especificidade de 75%, sensibilidade de 84%), ELISA na urina (com sensibilidade de 96% e especificidade de 79%) e um coprograma para antígenos bacterianos. Mais informações - Infecção por Helicobacter pylori: anticorpos para Helicobacter pylori no sangue

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Indicações para o procedimento teste da urease

A colonização da mucosa gástrica pelo H. pylori em si não é uma doença; é um fator de aumento da carga bacteriana no corpo, que sob certas condições pode desencadear o desenvolvimento de uma série de patologias do estômago e do trato gastrointestinal superior.

As indicações para o diagnóstico de infecção por Helicobacter, em particular o teste da urease, estão associadas a gastrite com acidez aumentada, gastrite antral e atrófica, duodenite, úlcera gástrica e úlcera duodenal, e linfoma MALT gástrico. Após a ressecção endoscópica de câncer gástrico em estágio inicial, um exame histológico pode ser realizado em combinação com um teste rápido da urease (FGDS) com teste da urease.

Os gastroenterologistas podem prescrever um teste de urease se os pacientes reclamarem de uma sensação de peso e desconforto na região epigástrica, azia frequente após comer, arrotos azedos ou podres, amargor na boca, náuseas, distúrbios intestinais, dores ou cólicas no estômago.

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Preparação

A preparação para o teste respiratório com ureia 13C consiste na interrupção do uso de antibióticos pelo paciente 4 semanas antes do teste, e de AINEs, inibidores da bomba de prótons (que reduzem a acidez estomacal) e antiácidos ou adsorventes usados para azia – pelo menos duas semanas antes. A administração de quaisquer medicamentos deve ser interrompida de cinco a seis dias, e o consumo de álcool e fumo – três dias antes do teste.

Também é recomendável evitar comer leguminosas por cerca de uma semana antes do teste, pois feijões, ervilhas, lentilhas, soja e feijão contêm urease (que protege as plantas de doenças e pragas de insetos).

Na noite anterior ao teste, um jantar pesado e tardio é contraindicado; no dia do teste, você deve fazer a higiene bucal normal e, uma hora e meia antes do teste, não deve beber nada nem usar chiclete.

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Técnica teste da urease

Técnica de implementação:

• Primeiro, uma amostra básica de respiração é coletada - uma exalação é feita em um recipiente de plástico macio (e hermeticamente fechado);
• líquido com 13C-ureia adicionado é tomado por via oral;
• Após 25-30 minutos, uma segunda amostra de ar exalado é coletada em outro recipiente.

As amostras obtidas desta forma são analisadas em um espectrômetro de massas, com separação dos isótopos em uma segunda amostra e determinação de sua concentração. A diferença entre os valores da segunda e da primeira amostra é expressa como delta (δ) em relação ao nível basal. Os valores normais, ou seja, valores negativos do átomo marcado 13C em pacientes não infectados, variam de 0,15 a 0,46%, e os valores positivos na presença de infecção variam de 1,2 a 9,5% com uma taxa de hidrólise da ureia superior a 12 a 14 μg/min.

Simplificando: a detecção de dióxido de carbono marcado com 13C no ar exalado indica que a ureia foi hidrolisada pela enzima urease H. pylori, o que, de fato, confirma sua presença no estômago.

Teste respiratório de H. pylori

O teste 13C-UBT ou teste respiratório com ureia 13C para Helicobacter pylori é um dos métodos não invasivos mais importantes para detectar essa infecção: com 100% de sensibilidade e 98% de especificidade, o risco de resultados falso-positivos e falso-negativos em comparação com a histologia e os testes de anticorpos no sangue é 2,3% menor.

A análise é baseada na hidrólise de ureia líquida administrada oralmente marcada com um átomo de carbono (isótopo estável não radioativo) 13C (50-75 mg de 13C-ureia diluída em 100 ml de líquido) pela urease de H. pylori.

A ureia marcada com um indicador isotópico sofre hidrólise no estômago com a liberação de amônia e dióxido de carbono contendo átomos marcados, que se difunde para o sangue e é excretado pelos pulmões durante a respiração. O dióxido de carbono marcado é registrado por um dispositivo analítico – um espectrômetro de massas, cujo funcionamento se baseia na espectroscopia seletiva de isótopos não dispersiva, ou um analisador espectroscópico de infravermelho.

Teste rápido de urease

O Teste Rápido da Urease (TUU) é realizado durante o exame endoscópico do estômago e duodeno – utilizando endofibroscópios modernos – e simultaneamente à coleta de amostras de biópsia. O biomaterial deve ser retirado da parte antral do estômago. Portanto, a fibrogastroduodenoscopia ou DGEF com teste da urease é um método diagnóstico invasivo.

A biópsia obtida é completamente imersa em um meio padronizado preparado contendo gel de ágar, ureia, indicador ácido-base fenolsulfoftaleína e um agente bacteriostático (adicionado para evitar o crescimento de microrganismos contaminantes e resultados falso-positivos).

Se a bactéria H. pylori estiver presente na amostra de tecido estomacal, a urease que ela produz hidrolisará a ureia e aumentará o pH, o que é claramente visível quando o indicador muda de amarelo para laranja (em pH 6,8) e roxo (em pH > 8). 75% dos testes positivos mudam de cor em 120 a 180 minutos, e quanto mais rápido o indicador mudar de cor, maior será o número de bactérias. No entanto, os testes que parecem negativos são mantidos por 24 horas.

Teste Rápido de Urease Positivo: O que Significa? Um teste de RUT positivo – o indicador fica vermelho – significa que a amostra de biópsia colocada no meio de ágar contém pelo menos 105 bactérias H. pylori, embora sua concentração geralmente seja maior.

A sensibilidade de várias modificações de teste varia na faixa de 90-98%, e a especificidade – 97-99%.

Conforme observado por gastroenterologistas, se a conclusão do paciente indicar um teste de urease fortemente positivo (três cruzamentos), isso significa: pH > 8, e o indicador mudou de cor em menos de 60 minutos a partir do momento da imersão da biópsia, o que indica um grande número de H. pylori e um alto nível de expressão de urease. O número aproximado de bactérias pode ser contado durante o exame histológico da biópsia ao microscópio, e se exceder 40-50 na área visualizada, o nível de infecção é considerado alto.

O teste respiratório com ureia 13C raramente dá resultados falso-positivos e, em pacientes com suspeita de úlcera gástrica ou duodenal, um teste positivo é considerado para confirmar o diagnóstico, enquanto um resultado negativo deve ser confirmado por EGD com teste de ureia.