Métodos imunológicos de diagnóstico de doenças hereditárias

Recentemente, como o importante marcador imunológico da genética populacional, o principal complexo de histocompatibilidade - HLA (Human Leukocyte Antigens) começou a ser considerado. Os antígenos deste sistema são determinados imunologicamente em leucócitos sanguíneos. O complexo dos genes HLA está localizado de forma compacta no braço curto do cromossomo 6 (6p21.3). A localização deste sistema eo comprimento da localização de seus loci no cromossomo possibilitaram calcular que o complexo é cerca de 1/1000 do pool de genes do organismo. Os antígenos de histocompatibilidade estão envolvidos na regulação da resposta imune do organismo, na manutenção da homeostase imune. Devido ao seu polimorfismo e compactação de localização de antígenos, HLA adquiriu grande importância como marcador genético.

Atualmente, mais de 200 alelos deste sistema são encontrados, é o mais polimórfico e biologicamente significativo dos sistemas genéticos do corpo humano. Violações de várias funções do principal complexo de histocompatibilidade contribuem para o desenvolvimento de uma série de doenças, principalmente auto-imunes, oncológicas e infecciosas.

De acordo com o arranjo do complexo HLA, os seguintes loci são distinguidos no cromossomo 6: D / DR, B, C, A. Mais recentemente, foram descobertos novos loci G, E, H, F, seu papel biológico é ativamente estudado no momento. No complexo principal de histocompatibilidade, distinguem-se três classes de antígenos. Os antígenos de Classe I são codificados pelos loci A, B, C. Os novos loci também pertencem a esta classe. Os antígenos Classe II são codificados pelos loci DR, DP, DQ, DN, DO. As classes de genes I e II codificam antígenos de transplante. Os genes Classe III codificam os componentes do complemento (C2, C4a, C4b, Bf), bem como a síntese de isoformas de várias enzimas (fosfoglucomutase, glicoxilase, pepsinogênio-5, 21-hidroxilase).

A presença de uma pessoa associada a uma certa doença de Ar permite-nos assumir uma maior predisposição a esta patologia, e com algumas correlações, pelo contrário, resistência a ela.

A determinação de antígenos do sistema HLA é realizada em linfócitos isolados do sangue periférico, utilizando os óvulos histotípicos em uma reação microfilmóxica ou por métodos genéticos moleculares.

O estabelecimento de vínculos associativos entre doenças e antígenos do principal complexo de histocompatibilidade permite:

• identificar grupos com maior risco de desenvolver a doença;
• para determinar o seu polimorfismo, ou seja, identificar grupos de pacientes com características do curso ou patogênese da doença; no mesmo plano, uma análise da sintetização de doenças, a elucidação das condições prévias genéticas para combinar várias formas de patologia; associação com antígenos que determinam resistência a doenças, permite identificar pessoas com risco reduzido dessa patologia;
• conduzir diagnóstico diferencial de doenças;
• determinar a previsão;
• para desenvolver táticas de tratamento otimizadas.

Devido ao fato de que a comunicação direta com os antígenos do principal complexo de histocompatibilidade não é rastreada para a maioria das doenças, uma teoria de "dois genes" foi proposta para explicar a associação entre doenças e antígenos de HLA, segundo a qual o gene (genes) da resposta imune (gene Ir) , estreitamente relacionados aos antígenos HLA e aos genes que regulam a resposta imune. Os genes protetores determinam a resistência a doenças e genes-provocadores - sensibilidade a certas doenças.

O risco relativo de doença para indivíduos com genótipo apropriado é calculado de acordo com a fórmula: x = [h _p x (1 - h _c )] / [h _c x (1 - h _p )], em que h _p - frequência característica em pacientes, e h _c - no grupo de controle.

O risco relativo mostra o valor de associação da doença com um certo Ar / Ar do sistema HLA (dá uma idéia de quantas vezes o risco de doença é na presença de Ar em comparação com a ausência). Quanto mais este indicador no paciente, maior a relação associativa com a doença.

Associação de Doenças Humanas com HLA-Ar (freqüência de genes,%)

Doenças	HLA	Grupo de controle,%	Pacientes,%	Risco relativo
Reumatologia
Espondilite anquilosante	В27	5-7	90-93	90-150
Síndrome de Wright	В27	6-9	69-76	32-49.6
Artrite causada por infecções:
- Yersinia	В27		58-76	17,59
- Salmonella	В27		60-69	17,57
Artrite psoriática	‡ 13		9-37	4.79
Artrite reumatóide	Dw4	12-19	48-72	3.9-12.0
	DR4	20-32	70	4.9-9.33
Síndrome de Behcet	V5	13	48-86	7.4 - 16.4
SLE	V5		11-34	1.83
	В8		19-48	2.11
	Bw15	6-10	21-40	5.1
	DR2	26.4	57.1	3.80
	DR3	22.2	46.4	2.90
Síndrome de Gujero-Sjogren	В8		38-58	3.15
	DW3	26	69-87	19,0
Cardiologia
IBS	В7	27,8	45,8	2.19
	В14	7,5	14,8	2.14
	V15	11.1	20.4	2.05
	Сw4	18,7	32.8	2.12
Doença hipertensiva	V18	10.4	22.6	2.52
	Аw19	12.6	28.3	2.74
Endocrinologia
Diabetes mellitus tipo 1	В8	32	52-55	2.1-2.5
	V18		5-59	1,65
	V15	12	18-36	1.89-3.9
	DW3	26	48-50	2,9-3,8
	Dw4	19	42-49	3.5-3.9
	DR3 DR3 / DR4	20	60	6,10 33
Hipertireoidismo	В8	21	35-49	2.34-3.5
	D3	26	61	4.4
	DR3	20	51	4.16
Tiroiditis subaguda (de Kervena)	Bw35	13	63-73	16,81
	DW1		33	2.1
Doença de Addison	В8		20-80	3.88-6.4
	DW3	26	70-76	8.8-10.5
Síndrome de Isenko-Cushing	A1		49	2.45
Gastroenterologia
Anemia perniciosa	В7	19	26-52	1.7-3.1
	DR5	6º	25	5.20
Gastrite atrófica	В7		37	2.55
Úlcera péptica do duodeno	A2	48.1	61.3	1,7
	A10	20.6	63.3	6.65
	В14	4.0	10.3	2,76
	V15	6.6	24.4	4.56
	B40	9.72	23.3	2.82
Hepatite auto-imune	В8	16	37-68	2.8-4.1
	DR4	24	71	7.75
Portadores de HBsAg	Bw41		12	11.16
	V15		10-19	0.29

Doenças	HLA	Grupo de controle,%	Pacientes,%	Risco relativo
Dermatologia
Psoríase	Bw17	6-8	22-36	3.8-6.4
	‡ 13	3-5	15-27	4.2-5.3
	Bw16	5	15	2.9
Dermatite herpetiforme	В8	27-29	62-63	4.00-4.6
	DR3	19	80	16.60
Esclerodermia	В7	24	35	1,7
Pênfigo	A10			3.1
Dermatite atópica	‡ 13	6.86	21.28	3.67
	В27	9.94	25.53	3.11
	A10 / B13	0,88	8.51	10.48
Eczema	A10	19.64	36,67	2.37
	В27	9.94	26.67	3.29
Urticária e edema Quincke	‡ 13	6.86	21.21	3.65
	V5,8	1.42	12.12	9.57
	V5,35	0,71	6.06	9.02
Neurologia
Esclerose múltipla	А3	25	36-37	2.7-2.8
	В7	25-33	36-42	1.4-2.0
	Dw2	16-26	60-70	4.3-12.2
	DR2	35	51,2	1,95
	DR3	20	32,5	1,93
Miastenia	В8	21-24	52-57	3.4-5.0
	A1	20-25	23-56	3,8
	DR3	26	50	2,5
Pneumologia
Asma brônquica (que ficou doente aos 19-30 anos de idade)	V21	4.62	12,5	2.95
	Â 22	9.94	19.64	2.22
	В27	12.31	37,5	4.27
	В35	0.11	5.36	51.4
	В27 / 35	0,47	7.14	16.2
Outras doenças
Rinite vasomotora	А3	26.98	52,38	2.98
	V17	7.57	28.57	4.88
	А3 / 10	2.72	23,83	11.18
	В7 / 17	0,47	9.52	22.28

Os dados na tabela mostram que os links associativos mais fortes são identificados para doenças com tipo de herança poligênica ou multifatorial.

Assim, a determinação de antígenos do principal complexo de histocompatibilidade em células sanguíneas (leucócitos) permite determinar o grau de predisposição individual a uma determinada doença e, em alguns casos, usar os resultados de estudos para diagnóstico diferencial, avaliação do prognóstico e escolha de táticas de tratamento. Por exemplo, a detecção de antígenos HLA-B27 é utilizada no diagnóstico diferencial de doenças auto-imunes. Encontra-se em 90-93% dos pacientes da raça Caucasóide com espondilite anquilosante e síndrome de Reiter. Em membros saudáveis desta raça, os antígenos HLA-B27 são detectados em apenas 5-7% dos casos. Os antígenos HLA-B27 são freqüentemente encontrados em artrite psoriática, doenças intestinais inflamatórias crônicas que ocorrem com sacroilite e espondilite, uveíte e artrite reativa.

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