Células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical

O sangue do cordão umbilical atua como fonte de células estaminais hematopoiéticas sobre o potencial proliferativo e as capacidades de repovoamento das células hematopoiéticas. Demonstrou-se repetidamente que, no momento da entrega, o sangue do cordão umbilical contém um número suficientemente grande de células progenitoras hematopoiéticas pouco comprometidas. Alguns autores acreditam que a vantagem de transplantar células-tronco hematopoiéticas de sangue do cordão umbilical é que não há necessidade de procurar um doador compatível com antígenos HLA. Na sua opinião, a imaturidade do sistema imunológico do recém-nascido causa uma diminuição da atividade funcional das células imunocompetentes e, consequentemente, a taxa de desenvolvimento da reação grave do "enxerto versus hospedeiro", em comparação com o transplante da medula óssea. Ao mesmo tempo, a taxa de sobrevivência do transplante de sangue do cordão umbilical não é menor do que a das células da medula óssea, mesmo que seja administrado um número menor de HSCs, com base em 1 kg do peso corporal do paciente. No entanto, na nossa opinião, as questões do número ótimo de células de transplante de cordão umbilical necessárias para o enxerto efetivo no organismo receptor, sua compatibilidade imunológica e vários aspectos do problema do transplante de células-tronco do sangue do cordão umbilical requerem análise mais séria.

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Obtenção de células-tronco hematopoiéticas de sangue do cordão umbilical

O procedimento para a obtenção de células estaminais hematopoiéticas de sangue umbilical requer a sua coleta imediatamente após o nascimento da criança e separando-a do parto, quando a placenta está no útero ou no ex utero, bem como na cesariana, mas também ex utero. Mostra-se que, no caso de uma redução no tempo desde o nascimento até a separação do recém-nascido da placenta até 30 segundos, o volume de sangue do cordão obtido aumenta em média em 25-40 ml. Com um procedimento posterior, a mesma quantidade de sangue é perdida. Está estabelecido que a separação precoce da criança contra a queima não implica conseqüências negativas para o recém-nascido.

O Instituto de Pesquisa Russo of Hematology and Blood Transfusion desenvolveu uma tecnologia eficaz e de baixo custo tanto para o sangue do cordão em linhagens fisiológicas ((70,2 + 25,8) ml) e cesariana ((73,4 + 25,1) ml). É proposta a técnica de separação do cordão umbilical com um rendimento suficientemente elevado de células nucleadas e mononucleares (83,1 + 9,6) e (83,4 + 14,1)%, respectivamente. Método melhorado para a criopreservação de sangue do cordão, o que garante uma elevada segurança de células mononucleares e de CFU-GM - (96,8 + 5,7) e (89,6 + 22,6)%, respectivamente. A eficiência do método de drenagem da amostragem de sangue do cordão umbilical utilizando o recipiente "Kompoplast-300" (Rússia) foi determinada. A amostragem de sangue do cordão umbilical foi realizada imediatamente após o nascimento da criança e separação do pós-parto, em condições de colocação da placenta no útero ou no ex utero. Antes da punção da veia do cordão, o cordão umbilical foi tratado uma vez com 5% de tintura de iodo e, em seguida, duas vezes com 70% de álcool etílico. O sangue fluía espontaneamente através dos tubos de conexão para o recipiente. A duração da cerca não demorou mais de 10 minutos. 66 Método volume de drenagem amostras de sangue umbilical recolhidos média (72 + 28) ml, e o número de leucócitos na amostra média total - (1,1 + 0,6) x x 107. A análise de sangue do cordão umbilical para a esterilidade (contaminação bacteriana, HIV-1 de vírus de hepatite B e C, sífilis, e infecção por citomegalovírus) em apenas uma amostra foram identificados anticorpos IgG ao vírus da hepatite C. Num outro estudo, uma vez a placenta após o nascimento superfície fetal foi colocada sobre um quadro especial para baixo, o cabo foi tratada com 5% de sódio iodo e 75% de etilo th álcool. As veias do cordão umbilical foram drenadas com uma agulha do sistema de transfusão (G16). O sangue escorreu espontaneamente ao recipiente. O volume de sangue assim retirado foi calculado (55 + 25) ml. Em G. Kogler et al. (1996), o sangue do cordão umbilical foi retirado por um método fechado e grandes volumes de sangue foram obtidos - em média (79 + 26) ml. Os autores observam que, dentre as 574 amostras de sangue do cordão umbilical, cerca de 7% contêm menos de 40 ml de sangue, o que torna impossível utilizá-las para o transplante. K. Isoyama e co-autores (1996), tomando sangue do cordão umbilical por exfusão ativa usando seringas, receberam uma média de 69,1 ml de sangue (o volume de sangue do cordão umbilical variou de 15 a 135 ml). Finalmente, os co-autores de A. Abdel-Mageed PI (1997) conseguiram obter, em média, 94 ml de sangue do cordão umbilical (de 56 a 143 ml) por cateterização da vulva.

Para reduzir o risco de infecção iatrogénica e contaminação por secreções maternas desenvolvidos recolha de sangue sistema fechado com base no sistema transfuzioinoy amplamente utilizado Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (EUA), contendo 62,5 ml de CPDA (citrato-fosfato-dextrose com adenina) como anticoagulante. A tecnologia de obtenção do material é primordial para a preparação de uma amostra qualitativa em relação ao volume, conteúdo e pureza da suspensão celular. Dos métodos actuais de recolha de sangue do cordão umbilical, kotoryeuslovno classificados em preferência sleduetotdavat sistema fechado, semi-aberta e aberta em primeiro lugar, como num sistema fechado, reduz significativamente o risco de contaminação microbiana do material, bem como a contaminação da suspensão de célula da célula mãe.

A. Nagler e co-autores (1998) realizaram uma análise comparativa da eficácia de todos os três sistemas de amostragem de sangue do cordão umbilical. Na primeira variante, o procedimento foi realizado em um sistema fechado por exfusão de sangue diretamente no recipiente. Na segunda variante, o sangue do cordão umbilical foi obtido pelo método de exfusão sanguínea ativa de seringas1 com lavagem adicional das veias da placenta e drenagem simultânea de sangue no recipiente (método aberto). Na terceira variante, o sangue foi retirado em um sistema semi-aberto extraindo-o ativamente com seringas e lavando através da artéria do cordão umbilical com exfusão simultânea no recipiente. Na primeira versão, os autores receberam sangue do cordão umbilical no volume (76,4 + 32,1) ml com uma contagem de leucócitos (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ por 1 ml de sangue. Na segunda variante, os índices correspondentes foram (174,4 + 42,8) ml e (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; no terceiro - (173,7 + 41,3) ml e (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. A infecção mais frequente das amostras de sangue do cordão umbilical foi observada quando se utilizava um sistema aberto. É estabelecida uma correlação direta entre a massa da placenta e o volume de sangue extraído - com o aumento da massa da placenta, aumenta a quantidade de sangue coletada.

Após a amostragem do sangue do cordão umbilical, o passo de separação segue-isolamento de células mononucleares e purificação da suspensão celular de eritrócitos. Sob as condições experimentais, as células nucleadas são isoladas pelo método de sedimentação com metilcelulose durante a lise de eritrócitos de amônio por cloreto. No entanto, para fins clínicos, a metilcelulose não deve ser utilizada, uma vez que a perda de células estaminais hematopoiéticas atinge 50-90%. A lise de eritrócitos em conexão com grandes volumes de solução de trabalho na clínica também quase não é realizada, embora a porcentagem de isolamento desta forma de células nucleadas com o fenótipo CD34 +, bem como células precursoras com funções CFU-GM e CFU-GEMM seja muito maior. Foi relatado um novo agente para o isolamento de células mononucleares na solução de densidade de comprador de gradiente de densidade (BDS72). Esta substância possui os seguintes parâmetros fisiológicos: pH - 7,4, osmolalidade - 280 mosm / kg, densidade - 1,0720 g / ml. Segundo os autores, com sua ajuda é possível isolar até 100% de células CD34-positivas e remover 98% dos glóbulos vermelhos. No entanto, a clínica ainda não aplica BDS72.

Em métodos comprovados para isolar células nucleadas do sangue do cordão umbilical, é usualmente utilizada uma solução a 10% de hidroxietil-amido ou uma solução de gelatina a 3%. A eficiência da precipitação de eritrócitos eo isolamento de células nucleadas em ambos os casos é aproximadamente igual. No entanto, quando a gelatina é utilizada como agente sedimentador, é possível obter uma quantidade um pouco maior de CFU-GM do que com hidroxietil amido. Supõe-se que a diferença na eficiência da recuperação de CFU-GM velocidade desigual devido à deposição de fracções individuais ou moléculas de HES células nucleadas capacidade absorvidos sobre os receptores da superfície das células hematopoiéticas e, assim, bloquear a sua sensibilidade aos factores estimuladores de colias, que são utilizados quando a cultura CFU-GM in vitro. No entanto, ambos os sedimentadores podem ser adequados para isolar células nucleadas ao criar bancos de sangue de cordão umbilical em grande escala.

Métodos de separação e criopreservação do sangue do cordão umbilical, em princípio, não diferem dos utilizados no trabalho com células-tronco hematopoiéticas de sangue periférico e medula óssea de dadores adultos. Mas ao preparar um grande número de amostras de sangue do cordão umbilical para seus bancos, os métodos de separação devem ser, em primeiro lugar, de baixo custo. Portanto, agora, infelizmente, para as necessidades clínicas já foram utilizados métodos de rotina de isolamento e criopreservação de células do sangue do cordão umbilical, e métodos mais efetivos, porém financeiramente efetivos, continuam sendo muitos experimentadores.

Em geral, os critérios para estimar o número de células hematopoiéticas e os requisitos para o estudo de amostras de sangue do cordão umbilical foram estabelecidos para identificar agentes infecciosos. Para garantir o transplante de células de sangue do cordão hematopoiético, todas as amostras de sangue devem ser examinadas principalmente para infecções hematógenas e doenças genéticas. Alguns autores recomendam métodos especiais adicionais para a investigação do sangue do cordão umbilical para diagnosticar doenças genéticas como a-talassemia, anemia falciforme, deficiência de adenosina desaminase, agamaglobulinemia de Bruton, doença de Harler e Ponter.

De acordo com as recomendações de L. Ticheli e co-autores (1998), em cada amostra de sangue do cordão umbilical é necessário determinar o número de células nucleadas, células SB34-positivas e CFU-GM, conduzir HLA-tipagem, determinar o grupo sanguíneo pela ABO e seu acessório Rh. Além disso, são realizadas inoculações bacteriológicas, testes serológicos para HIV e infecção por citomegalovírus, HBsAg, hepatite C viral, HTLY-I e HTLV-II (leucemia de células T humanas), sífilis e toxoplasmose. É obrigatória uma reação em cadeia da polimerase ao citomegalovírus e à infecção pelo HIV.

O próprio procedimento para a obtenção de sangue do cordão umbilical deve ser realizado de acordo com os princípios da bioética médica. Antes do início da coleta de sangue, é necessário obter o consentimento da mulher grávida para sua implementação. A entrevista preliminar com uma mulher grávida para obter o consentimento informado para realizar todas as manipulações, desde exfusão de sangue até a conclusão da documentação, é realizada apenas por pessoal médico. Em nenhum caso, é aceitável realizar qualquer um desses procedimentos por pessoal que tenha uma educação biológica, química, farmacêutica e outra não médica, tendo em vista a violação das normas estabelecidas de bioética e direitos humanos. Com testes positivos para o transporte de HBsAg, a presença de anticorpos contra patógenos da hepatite C, infecção pelo HIV e sífilis, o sangue do cordão umbilical não é retirado e as amostras de sangue já coletado são descartadas e destruídas. Deve notar-se que o transporte de infecções latentes em recém-nascidos é muito mais raro do que em adultos, por conseguinte, a probabilidade de transferência e o desenvolvimento de complicações infecciosas de infusões hematopoiéticas de células do sangue do cordão hemática é significativamente menor do que no caso de transplante de medula óssea a partir de dadores adultos.

Um ponto importante na aplicação do sangue do cordão umbilical na clínica é a avaliação do transplante, que se baseia na determinação do número de células estaminais hematopoiéticas na amostra de sangue do cordão umbilical e as doses celulares necessárias para o transplante. Os padrões para o número ótimo de células sanguíneas do cordão umbilical necessárias para o transplante ainda não foram desenvolvidos. Não existe um ponto de vista geralmente aceito mesmo em parâmetros de rotina como o número de células CD34-positivas e CFU-GM. Alguns autores avaliam o potencial das células hematopoiéticas através da análise de culturas a longo prazo com a determinação da concentração de unidades formadoras de colônias comuns a granulócitos, eritrócitos, monócitos e megacariócitos - CFU-GEMM.

No entanto, em contextos clínicos, a avaliação padrão do transplante de sangue do cordão umbilical geralmente inclui apenas a determinação do número de células nucleadas ou mononucleares.

Armazenamento de células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical

Existem alguns problemas na tecnologia de armazenamento de células hematopoiéticas do cordão umbilical. Quando a criopreservação de células estaminais hematopoiéticas, a fim de atingir o seu modo de congelação óptima deve minimizar a quantidade de sangue do cordão umbilical e células vermelhas do sangue previamente removidos para evitar hemólise e o risco de reacção incompatibilidade de antigénios de eritrócitos (ABO, Rh). Para estes propósitos, são adequados vários métodos para isolar células nucleadas. No início dos anos 90 do século passado, o método mais utilizado era o isolamento de células nucleadas em um gradiente de densidade baseado em uma ficoll com uma densidade de 1,077 g / ml ou percola com uma densidade de 1.080 g / ml. A separação do sangue do cordão umbilical no gradiente de densidade permite isolar células predominantemente mononucleares, mas leva a perdas significativas de células progenitoras hematopoiéticas - até 30-50%.

A eficiência de sedimentação de hidroxietil amido no processo de isolamento de células do sangue do cordão umbilical é estimada de diferentes maneiras. Alguns autores indicam uma baixa qualidade de separação usando este método, enquanto outros pesquisadores, ao contrário, entre todos os métodos possíveis, preferem alocar o sangue do cordão HSC usando precisamente uma solução de 6% de hidroxietil amido. Isso destaca a alta eficiência de sedimentação de células hematopoiéticas, que, de acordo com alguns dados, atinge de 84% a 90%.

Os defensores de outro ponto de vista acreditam que praticamente todos os métodos de fracionamento envolvem grandes perdas de células nucleadas e sugerem separação por centrifugação, dividindo o sangue do cordão umbilical em 3 frações: eritrócitos, anel leucocitário e plasma. Ao isolar as células dessa maneira, os autores descobriram que o conteúdo de células mononucleares, células progenitoras hematopoiéticas precoces e células com o imunofenotipo CD34 +, em última análise, era de 90, 88 e 100% do nível original, respectivamente. Valores semelhantes do crescimento das células sanguíneas do cordão umbilical purificadas por este método foram obtidos por outros pesquisadores: 92% das células nucleadas, 98% - mononucleares, 96% - células CD34 e 106% das unidades formadoras de colônias foram isoladas após a sedimentação.

No final da década de 1990, a gelatina foi amplamente utilizada como agente sedimentador. Na prática clínica, com a ajuda da gelatina, as células estaminais hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical foram isoladas desde 1994. Ao usar uma solução a 3% de gelatina, a eficiência do isolamento de células nucleadas atinge 88-94%. O uso generalizado de gelatina no desenvolvimento do banco de sangue do cordão umbilical confirmou suas vantagens em relação a outros agentes de sedimentação. A análise comparativa de todos os métodos acima de isolamento de células nucleadas em termos da sua utilização sequencial em cada uma das amostras de sangue do cordão teste mostrou que as células mononucleares do sedimentador-out óptimos com o fenótipo de células CD34 + / CD45 +, bem como ao número de CFU-GM e CFU-GEMM é de 3% solução de gelatina. Os métodos que utilizam um gradiente de densidade de ficoll, bem como o uso de hidroxietil amido e metilcelulose, em que a perda de células hemopoiéticas atingiu 60%.

A expansão do volume de transplante de células-tronco do sangue do cordão umbilical está associada não apenas ao desenvolvimento de métodos para sua produção, mas também ao armazenamento. Existem muitos problemas diretamente relacionados à preparação do sangue do cordão umbilical para o armazenamento a longo prazo e a escolha da tecnologia de criopreservação ideal para suas amostras. Entre eles estão as questões da conveniência de realizar procedimentos de separação, o uso de vários meios criopreservadores e o uso de métodos para a preparação de células descongeladas para transplante. O transporte de amostras nativas de sangue do cordão umbilical geralmente é realizado em regiões distantes dos centros hematológicos. Em conexão com isso, surge o problema dos períodos permitidos para armazenamento de sangue do cordão umbilical desde o momento da sua recepção até o início da criopreservação, o que é de particular importância no desenvolvimento de bancos de sangue do cordão umbilical.

A investigação da atividade funcional das células do sangue do cordão hematopoiético após armazenamento prolongado (até 12 anos) em nitrogênio líquido nos permitiu estabelecer que cerca de 95% das células hematopoiéticas não perdem sua alta capacidade proliferativa durante esse período. S. Yurasov e co-autores (1997) mostraram que o armazenamento de sangue do cordão umbilical à temperatura ambiente (22 ° C) ou a 4 ° C durante 24 e 48 horas não reduz significativamente a viabilidade das células hematopoiéticas, o que é 92 e 88%. No entanto, se o tempo de armazenamento for prolongado para três dias, o número de células nucleadas viáveis no sangue do cordão umbilical é significativamente reduzido. Ao mesmo tempo, durante outros estudos, verificou-se que, quando armazenados durante 2-3 dias a uma temperatura de 22 ou 4 ° C, a viabilidade de granulócitos maduros, em vez de células hematopoiéticas, afeta principalmente.

A viabilidade das células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical pode ser afetada negativamente pelos componentes do sistema para sua coleta. Análise do efeito de diferentes anticoagulantes, cujo mecanismo de acção é devido à ligação dos iões de cálcio (ACD, EDTA, XAPD-1) para células progenitoras hematopoiéticas em condições de armazenamento do sangue do cordão de 24 a 72 horas revelou o seu impacto negativo sobre a viabilidade das células nucleadas. A este respeito, os autores recomendam o uso de PBS (solução de tampão de fosfato) com a adição de heparina nativa sem conservante a uma concentração de 20 U / ml, o que, na sua opinião, permite prolongar o tempo de armazenamento do sangue do cordão não ralado até 72 horas e preserva a atividade funcional das unidades formadoras de colônias. No entanto, ao estudar a segurança de CFU-GM e CFU-G, é demonstrado que o tempo de armazenamento de sangue do cordão umbilical antes da criopreservação não deve exceder nove horas. Obviamente, neste caso, o princípio deve funcionar, segundo o qual, na presença de dados conflitantes, a vida mínima recomendada de sangue do cordão umbilical deve ser usada e proceder ao congelamento programável das células isoladas o mais rápido possível.

Ao congelar células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical, uma solução a 10% de DMSO é geralmente usada como crioprotetor. No entanto, além do efeito crioprotetor expresso, o dimetilsulfóxido nesta concentração tem um efeito citotóxico direto, mesmo sob a condição de exposição mínima às células formadoras de sangue do sangue do cordão umbilical. Para reduzir o efeito citotóxico do DMSO, é aplicada uma temperatura de exposição zero, aumento da velocidade de todas as manipulações e lavagem repetida após o descongelamento de amostras de cordão umbilical.

O Instituto de Hematologia e Transfusiologia da Academia de Ciências Médicas da Ucrânia vem desenvolvendo uma direção científica desde 1995, cujo objetivo é estudar o sangue do cordão umbilical como fonte alternativa de células hematopoiéticas do caule. Em particular, foram desenvolvidas novas tecnologias para a criopreservação a baixa temperatura de células hematopoiéticas de sangue do cordão umbilical não fraccionado e fracionado. Como crioprotector, utiliza-se polivinilpirrolidona médica de baixo peso molecular. O método de criopreservação do sangue do cordão umbilical não fundamentado baseia-se na tecnologia original de pré-preparação de células para congelamento e na técnica de tratamento especial da suspensão celular imediatamente antes do transplante.

Um dos fatores mais importantes que afetam o nível de atividade funcional de células-tronco hemopoiéticas criopreservadas é a taxa de resfriamento da suspensão celular, especialmente durante a fase de cristalização. Uma abordagem de software para resolver o problema da velocidade e do tempo de congelamento oferece excelentes oportunidades para criar métodos simples e altamente eficazes de criopreservação, sem lavar a suspensão celular de crioprotectores antes do transplante.

Os estágios de congelamento imediato e descongelamento são mais perigosos para a viabilidade das células durante a preparação. Ao congelar as células hemopoiéticas, uma parte significativa delas pode ser destruída no momento da transição do meio intercelular do líquido para a fase sólida - cristalização. Para reduzir a percentagem de morte celular, utilizam-se crioprotectores, cujos mecanismos de acção e eficácia crioprotectora foram adequadamente abordados na literatura científica.

Um promissor Técnicas sentido de optimização da criopreservação de medula óssea e de células do sangue do cordão umbilical é o de combinar, na mesma solução a baixas concentrações de agentes crioprotectores com vários mecanismos de acção diferentes, por exemplo, que actua sobre o nível intracelular de DMSO e o amido de hidroxietilo ou a albumina possuindo efeito envolvente extracelular.

Para a criopreservação de células do sangue do cordão umbilical, é tradicionalmente utilizada uma solução de 20% de DMSO que, enquanto se agita mecanicamente constantemente em um banho de gelo, é lentamente derramada na suspensão celular até obter uma relação igual (1: 1) de crioprotetor e suspensão celular. A concentração final de sulfóxido de dimetilo é de 10%. A suspensão celular é então arrefecida em um criostato de software com uma velocidade de HS / min a -40 ° C, após o que a taxa de resfriamento é aumentada para 10 ° C / min. Após atingir -100 ° C, o recipiente com a suspensão celular é colocado em nitrogênio líquido (-196 ° C). Com este método de criopreservação, a segurança das células mononucleares funcionalmente ativas após a descongelação atinge 85% do nível inicial.

As modificações dos métodos de criopreservação destinam-se a reduzir a concentração de DMSO por adição de hidroxietil amido (as concentrações finais de dimetilsulfóxido e hidroxietilamidão são 5% e 6%, respectivamente). A alta eficiência desta combinação de crioprotectores é observada quando a suspensão de células mieloides está congelada, com menos citoproteção do que com uma única solução a 10% de dimetilsulfóxido. O número de células nucleadas viáveis atingiu 96,7% do nível basal, e sua atividade funcional, estimada pelo número de CFU-GM, foi de 81,8%.

Utilizando uma solução de dimetilsulfóxido em concentrações de 5 a 10% em combinação com 4% de hidroxietil amido (concentração final), estabeleceu-se que a segurança das células CD34-positivas em tais faixas de dimetilsulfóxido praticamente não muda. Ao mesmo tempo, em condições de diminuição da concentração de dimetilsulfóxido de 5 a 2,5%, observa-se perda em massa de células do sangue do cordão umbilical - o número de unidades celulares viáveis diminui de 85,4 para 12,2%. Outros autores também chegaram à conclusão de que exatamente 5 e 10% de soluções de dimetilsulfóxido (na versão do autor - em combinação com soro autólogo) fornecem citoproteção com criopreservação do sangue do cordão HSC com máxima eficiência. Além disso, é observada uma elevada preservação de células sucessivamente congeladas e descongeladas no caso de uma combinação de 5 ou 10% de dimetilsulfóxido com 4% de solução de hidroxietil amido, especialmente a uma taxa de arrefecimento controlada de HS / min. Em outro trabalho, foi adicionada uma solução de crioprotecção constituída por três ingredientes - DMSO, albumina humana purificada e meio RPMI em proporção de 1: 4: 5, que foi adicionado à suspensão celular a uma proporção de volume igual (a concentração final de dimetilsulfóxido foi de 5%). Após a descongelação em banho-maria a uma temperatura de + 4 ° C, a segurança do CFU-GM excedeu 94%.

Alguns autores sugerem o uso de sangue de cordão não traçado para a criopreservação, uma vez que quantidades significativas de células hematopoiéticas são perdidas durante a remoção de glóbulos vermelhos. Nesta forma de realização, uma solução a 10% de dimetilsulfóxido é utilizada para proteger as células mononucleares dos efeitos nocivos da criocristalização. O congelamento é realizado a uma taxa de resfriamento constante de HS / min a -80 ° C, após o que a suspensão de células sanguíneas do cordão umbilical é imersa em nitrogênio líquido. Com este método de congelamento, ocorre uma lise parcial dos eritrócitos, portanto amostras de sangue não requerem fracionamento. Após a descongelação, a suspensão celular é lavada de hemoglobina livre e dimetilsulfóxido numa solução de albumina humana ou no soro autólogo do paciente e utilizada para transplante.

Preservação de células progenitoras hematopoiéticas após a descongelação sangue do cordão umbilical não fraccionada é de facto mais elevada do que a fraccionado, mas em ligação com krioustoychivostyu das células vermelhas do sangue podem causar problemas graves como resultado de Transfusão de pós-transfusão de células vermelhas ABO-incompatível. Além disso, o volume de sangue não absorvido armazenado aumenta significativamente. Do ponto de vista clínico, é ainda preferível criopreservir pré-isolados e purificados a partir de outras fracções celulares de células do sangue do cordão hematopoiético.

Em particular, foi desenvolvido um método para a criopreservação de células de sangue de cordão fracionado, o que possibilita a remoção de eritrócitos no estágio de preparação para congelamento, em que uma solução a 6% de hidroxietil amido é utilizada como parte da solução de substituição de plasma "Stabisol". Após o descongelamento, a suspensão celular assim obtida está pronta para uso clínico sem manipulação adicional.

Assim, no presente, existem muitas formas bastante efetivas de criopreservação do sangue do cordão umbilical. A principal diferença é que as amostras de sangue são congeladas não fracionadas ou submetidas a separação em frações celulares durante o estágio de preparação e colhidas células nucleadas sem uma mistura de eritrócitos.

Transplante de células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical

No final dos anos 80 - início dos anos 90 do século passado, descobriu-se que o sangue do cordão umbilical que fornece o feto durante a gravidez caracteriza-se por um alto teor de células estaminais hematopoiéticas. A simplicidade relativa da obtenção de células do sangue do cordão umbilical e a ausência de problemas éticos evidentes promoveu o uso de células-tronco do sangue do cordão umbilical em medicina prática. O primeiro transplante bem sucedido de sangue de cordão para uma criança com anemia de Fanconi serviu como ponto de partida para expandir os volumes de transplante de células estaminais de sangue do cordão umbilical e criar um sistema para a provisão bancária. No sistema global de bancos de sangue do cordão umbilical, o maior é o New York Center for Placental Blood, que está no balanço dos Institutos Nacionais de Saúde. O número de amostras de sangue de cordão armazenadas neste banco está se aproximando de 20 LLC. O número de receptores (principalmente crianças) também está crescendo e o transplante bem-sucedido foi realizado. De acordo com o Departamento de Saúde dos EUA, o período sem transição de vida pós-transplante de receptores de sangue do cordão HSC já ultrapassou os 10 anos.

Isso não é surpreendente, uma vez que numerosos estudos sobre o potencial hematopoiético do sangue do cordão umbilical mostraram que a quantidade e a qualidade das primeiras células estaminais não são apenas inferiores à medula óssea de uma pessoa adulta, mas ela é superada por alguns indicadores. O maior potencial proliferativo das células-tronco do sangue do cordão umbilical é devido às características ontogenéticas da sinalização celular, à presença de fatores de crescimento específicos nos receptores HSC, à capacidade de células do sangue do cordão umbilical para a produção de fatores de crescimento autocrino, tamanho grande e comprimento de telómero.

Assim, características genômicas e fenotípicas das células sanguíneas do cordão umbilical formadoras de sangue de tronco predetermem o enxerto qualitativo de um transplante com alto potencial para a restauração da hemopoiese do doador no organismo receptor.

Vantagens das células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical

Entre os benefícios reais do uso de células-tronco hematopoiéticas de sangue do cordão umbilical para transplante em frente de outras fontes de células hematopoiéticas, deve-se notar o risco quase zero para a saúde do doador (se não conta como placenta) e a ausência da necessidade de anestesia geral. O uso do sangue do cordão umbilical amplia as possibilidades de transplante celular devido ao transplante parcialmente compatível no sistema HLA (incompatibilidade de um a três antígenos). Foi desenvolvida uma técnica para o armazenamento prolongado de células hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical em um estado congelado, o que aumenta a probabilidade de obter tipos HLA raros e reduz o tempo de busca de um transplante compatível com HLA para o transplante alogênico. Ao mesmo tempo, o risco de desenvolver algumas infecções latentes transmitidas pela via de transmissão é significativamente reduzido. Além disso, existe uma forma barata de seguro de vida biológica em conexão com a possibilidade de usar células de sangue do cordão umbilical para transplante autólogo.

No entanto, devido às pequenas quantidades de sangue que podem ser coletadas da placenta (uma média de não mais de 100 ml), o problema de obter a maior quantidade possível de sangue da veia do cordão umbilical, com estrita adesão ao risco mínimo de contaminação bacteriana das amostras de sangue do cordão umbilical obtidas, surge.

As células sanguíneas de cordão hematopoiético primitivo são geralmente identificadas pela presença na superfície da glicosophosfoproteína CD34, e também com base em suas propriedades funcionais, estudando a clonogenicidade ou a formação de colônias in vitro. Análise comparativa mostrou que, no sangue do cordão umbilical e da medula óssea teor máximo de células mononucleares positivas para CD34 na fracção são respectivamente 1,6 e 5,0%, o nível máximo de unidades formadoras de colónias de uma subpopulação de células + CD34 - 80 e 25%, a eficiência total de clonagem de células CD34 + células - 88 e 58%, o teor máximo de células formadoras de colônias com alto potencial de proliferação (HPP-CFC na população CD34 +) é de 50 e 6,5%. Para isso, deve-se acrescentar que a eficiência da clonagem de células CD34 + CD38 e a capacidade de resposta à estimulação de citoquinas também é maior em células estaminais hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical.

A combinação dos antígenos fenotípicos Thy-1, CD34 e CD45RA confirma o alto potencial proliferativo das células hematopoiéticas formadoras de sangue e a expressão desses três antígenos na superfície das células do sangue do cordão umbilical indica sua pertença às células-tronco. Além disso, foi estabelecido que o sangue do cordão umbilical contém células com um fenótipo CD34 + que não possuem marcadores de diferenciação linear. O nível no sangue do cordão umbilical das subpopulações celulares com o perfil fenotípico de CD34 + / Lin é cerca de 1% do número total de células CD34-positivas. As células precursoras de sangue de cordão hematopoiético dão origem à linhagem celular linfóide e à série mielóide polipotente de diferenciação celular linear, o que também indica sua pertença a células-tronco.

Como já mencionado, as diferenças essenciais entre medula óssea e sangue do cordão umbilical são a quantidade de células hematopoiéticas utilizadas para o transplante, obtidas com um procedimento. Se, durante o transplante de medula óssea, a perda de massa celular durante a separação, criopreservação, descongelação e teste é admissível dentro de 40-50%, então, para o sangue do cordão umbilical, tais perdas celulares são muito significativas, uma vez que o uso de um número insuficiente de enxerto de GSK pode ser insustentável. De acordo com G. Kogler e co-autores (1998), para todos os transplantes de células com um peso corporal de 10 kg, todas as amostras de sangue do cordão umbilical podem ser possíveis enxertos (número total de amostras de sangue do cordão umbilical coletadas - 2098), com peso corporal de 35 kg - 67%, e somente 25% das amostras serão capazes de fornecer transplante efetivo em pacientes com peso corporal de 50-70 kg. Esta situação clínica indica a necessidade de otimizar e melhorar a eficácia dos métodos existentes de amostragem, reprodução e armazenamento de células do sangue do cordão umbilical. Portanto, atualmente, na literatura, são amplamente discutidos os problemas de padronização de métodos para amostragem, teste, separação e criopreservação do sangue do cordão umbilical para a criação de bancos de sangue, sua aplicação na clínica, bem como condições e termos de armazenamento de células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical.

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O uso de células-tronco hematopoiéticas de sangue do cordão umbilical em medicina

Normalmente, até 10 ⁶ células estaminais hematopoiéticas podem ser isoladas do sangue do cordão umbilical , raramente mais. Em conexão com isso, até hoje, a questão permanece da suficiência de muitas células hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical para restaurar a hematopoiese do receptor adulto. As opiniões sobre esta questão foram divididas. Alguns pesquisadores acreditam que esta quantidade é suficiente para o transplante para crianças, mas muito pouco para um transplante para um adulto, para o qual a administração ideal (7-10) x 10 ⁶ células positivas para CD34 por 1 kg de peso corporal é, em média, 7 x 10 ⁸ por transplante. A partir desses cálculos, segue-se que uma amostra de cordão umbilical contém células-tronco hematopoiéticas 700 vezes menos do que é necessário para um transplante para um paciente adulto. No entanto, essa avaliação quantitativa é feita por analogia com o número de células transfundidas na medula óssea e ignora completamente as características ontogênicas da hematopoiese.

Em particular, ele ignora o facto da capacidade proliferativa mais elevada de células estaminais hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical, em comparação com as células progenitoras hematopoiéticas de medula óssea. Os resultados dos estudos do potencial de formação de colônia in vitro sugerem que uma dose de sangue do cordão umbilical pode fornecer uma reconstituição da hematopoiese do receptor adulto. Por outro lado, não se deve esquecer que a quantidade de HSC diminui mesmo no processo de desenvolvimento embrionário: o conteúdo de células CD34-positivas no cordão umbilical é linearmente reduzido em um fator de 5 em 20 semanas (sangue obtido para término prematuro da gravidez) até 40 semanas de gestação (o período de partos fisiológicos), que é acompanhado por um aumento paralelo e permanente na expressão de marcadores de citoferifação linear.

Devido à falta de uma abordagem padronizada para a quantificação de células progenitoras em amostras de sangue do cordão umbilical, a controvérsia sobre a dose ideal de células-tronco hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical continua. Alguns pesquisadores acreditam que o número de células nucleadas e células mononucleares, recalculado para o peso corporal do receptor, ou seja, sua dose, pode ser usado como critério para seleção de amostras de cordão umbilical. Alguns autores acreditam que o limiar quantitativo mínimo de células CD34 +, mesmo para realização de transplante autólogo de HSC, é de 2 x 10 ⁶ / kg. Ao mesmo tempo, o aumento da dose de células hemopoiéticas para 5 x 10 ⁶ células / kg (apenas 2,5 vezes) já fornece um curso mais favorável do período pós-transplante precoce, reduz a incidência de complicações infecciosas e reduz a duração do período de antibioticoterapia preventiva.

De acordo com E. Gluckman e co-autores (1998), em oncohematologia, a condição para o transplante bem sucedido de células do sangue do cordão umbilical é a introdução de pelo menos 3.7 x 10 ⁷ células nucleadas por 1 kg de peso corporal do receptor. Com uma diminuição na dose de células-tronco hematopoiéticas para 1 x 10 ⁷ e menos células nucleadas por 1 kg de peso corporal, o risco de insuficiência de enxerto e recorrência de câncer é acentuado. Deve reconhecer-se que o número mínimo de células progenitoras necessárias para a recuperação rápida da hemopoiese após o alotransplante GSG ainda não é conhecido. Teoricamente, isso pode ser alcançado com uma única célula, mas na prática clínica do transplante de medula óssea, o enxerto rápido e estável é garantido por transfusão de pelo menos (1-3) x 10 ⁸ células nucleadas por 1 kg do peso corporal do paciente.

Um estudo detalhado recente para determinar a quantidade ideal de HSC em oncohematologia incluiu a observação de pacientes de três grupos isolados, dependendo do conteúdo de células CD34-positivas no material de transplante. Os pacientes do primeiro grupo receberam (3-5) x 10 ⁶ células / kg. A dose de HSC em pacientes do segundo grupo foi (5-10) x 10 ⁶ células / kg, e os pacientes do terceiro grupo receberam transplante mais de 10 x 10 ⁶ células CD34 + / kg. Os melhores resultados foram observados no grupo de receptores que receberam um transplante com o número de células CD34-positivas iguais a (3-5) x 10 ⁶ / kg. Com um aumento na dose de células transplantadas acima de 5 × 10 ⁶ / kg, não foram identificados benefícios estatisticamente significativos. Ao mesmo tempo, um conteúdo HSC muito grande no transplante (> 10 x 10 ⁶ / kg) está associado à reinfusão de um número significativo de células tumorais residuais, o que leva a uma recaída da doença. Não houve relação direta entre o número de células progenitoras alogênicas transplantadas e o desenvolvimento da reação do "enxerto versus hospedeiro".

A experiência mundial acumulada de transplante de sangue do cordão HSC confirma seu alto potencial de repovoamento. A taxa de enxertia do transplante de sangue do cordão umbilical correlaciona-se com o número de células nucleadas introduzidas. Os melhores resultados são observados com um transplante de 3 × 10 ⁷ / kg, enquanto que para a medula óssea esta dose é de 2 × 10 ⁸ / kg. De acordo com os dados dos centros de coordenação, no final de 2000, 1200 transplantes de células do cordão umbilical foram feitas no mundo, principalmente de parentes doadores (83%). Obviamente, o sangue do cordão umbilical deve ser considerado uma alternativa à medula óssea para o transplante para pacientes com hemoblastose.

No entanto, neonatal natureza Cordova fonte de tecido hematopoiético incentivando devido à presença de características funcionais de sua GCW. No entanto, apenas uma experiência clínica pode dar uma resposta à pergunta do adequação de uma amostra de sangue do cordão umbilical para a reconstituição hematopoiética adulto do destinatário com aplasia da hematopoiese. Transplante de células do sangue do cordão é utilizado no tratamento de muitas doenças de tumor e não de tumor natureza: leucemias e síndromas mielodisplásicos, linfoma não-Hodgkin, e neuroblastoma, anemia aplástica, congénita anemia de Fanconi e ventilador Black Diamond, deficiência de adesão dos leucócitos, síndrome Barr, síndrome Gunther doença Harlera, talassemia .

Atenção e investigação separada merecem os aspectos imunológicos do transplante de células formadoras de sangue do sangue do cordão umbilical. Mostra-se que, no caso do transplante de células-tronco do sangue do cordão umbilical de doadores com compatibilidade HLA incompleta, os resultados do transplante são bastante satisfatórios, o que, de acordo com os autores, indica uma imunorreatividade menor das células do sangue do cordão umbilical do que a medula óssea.

Um estudo detalhado da composição celular do sangue do cordão umbilical revelou características do espectro fenotípico das células efetoras do sistema imunológico e sua atividade funcional, o que possibilitou o tratamento do sangue do cordão umbilical como fonte de HSC com um risco relativamente baixo de desenvolver uma reação do "enxerto versus hospedeiro". Entre os sinais de imaturidade funcional das células do sangue do cordão umbilical imunocompetentes, deve-se notar um desequilíbrio na produção de citoquinas e uma diminuição da sensibilidade à regulação da citocina da resposta imune. A inibição resultante da atividade de linfócitos citotóxicos é considerada um fator que contribui para a formação de tolerância imunológica ao tecido hematopoiético transplantado. Na população de linfócitos do sangue do cordão umbilical, em contraste com o sangue periférico e a medula óssea de dadores adultos, predominam linfócitos inativos, imaturos e células supressoras. Isso indica uma diminuição da disponibilidade de linfócitos T de sangue do cordão umbilical para a resposta imune. Uma característica importante da população de monócitos de células do sangue do cordão umbilical é o baixo teor de células apresentadoras de antígenos funcionalmente completas e ativas.

Por um lado, o baixo grau de maturidade das células efetoras do sistema imune no sangue do cordão umbilical expande as indicações para seu uso na clínica, uma vez que estas características proporcionam uma diminuição da intensidade do conflito imune entre as células doadoras e receptoras. Mas, por outro lado, sabe-se que existe uma correlação entre o grau de desenvolvimento da reação do "enxerto versus hospedeiro" e o efeito antitumoral do transplante, ou seja, o desenvolvimento do efeito "enxerto versus leucemia". Em conexão com isso, foi realizado um estudo da citotoxicidade antitumoral das células do sangue do cordão umbilical. Os resultados obtidos mostram que, apesar da resposta realmente enfraquecida das células do sangue do cordão umbilical imunocompetente à estimulação antigênica, os linfócitos primariamente ativados são assassinos naturais e células assassinas que participam ativamente dos mecanismos de citotoxicidade antitumoral. Além disso, em subpopulações de linfócitos do sangue do cordão foram encontrados com o fenipo CD16 + CD56 + e CD16 "Tcra / p +. Supõe-se que estas células estão numa forma activada implementar reacção" enxerto-versus-leucemia".

No Instituto de Oncologia, Academia de Ciências Médicas da Ucrânia células hematopoiéticas criopreservadas a partir de sangue do cordão umbilical foram administradas a pacientes de cancro com hipoplasia persistente da hematopoiese devido a quimioterapia e radioterapia. Em tais pacientes, o transplante de células-tronco hematopoiéticas do sangue umbilical efetivamente restaurou a hematopoiese oprimida, como evidenciado por um aumento persistente do conteúdo de elementos maduros no sangue periférico, além de um aumento nos parâmetros que caracterizam o estado da imunidade celular e humoral. A estabilidade do efeito de repovoamento após o transplante de células formadoras de sangue do sangue do cordão umbilical permite a continuação da radiação e quimioterapia sem interromper o curso do tratamento. Há evidências de doentes com cancro do sangue do cordão de células estaminais maior eficiência de aloenxerto: o risco anual de recorrência de um tumor na sua utilização, foi de 25% versus 40% em pacientes com um gene de medula óssea alogénica transplantado.

O mecanismo de acção de células-tronco do sangue do cordão criopreservados deve ser considerada como o resultado de uma estimulação humoral de destinatários hematopoiese causadas pela capacidade única de células neonatais a autócrino de produção de factores de crescimento hematopoiéticos, assim como uma consequência do enxerto temporária de células do dador (como uma confirmação - um aumento significativo no conteúdo de sangue periférico hemoglobina fetal destinatário 15/07 dia após a transfusão em comparação com dados basais). Ausência em receptores de reacções pós-transfusão de sangue de cordão - resultado da sua relativa tolerância das células do sistema imunológico, bem como o critério de confiança a utilidade do material biológico criopreservado.

Células progenitoras de linfócitos T de sangue do cordão assassino capaz de activação sob o efeito de estimulação de citocina exógena que é utilizado para desenvolver novas ex vivo e in vivo em métodos de indução de células linfóides citotóxicas anti-tumorais para subsequente imunoterapia de transplante. Além disso, a "imaturidade" do genoma das células do sangue do cordão umbilical imunocompetente permite que elas sejam usadas para aumentar a atividade antitumoral por métodos de modelagem molecular.

Hoje, o sangue do cordão umbilical encontrou ampla aplicação principalmente em hematologia pediátrica. Em crianças com leucemia aguda, o alotransplante de células estaminais hematopoiéticas no cordão umbilical, em comparação com alotransplante de medula óssea, reduz significativamente a incidência de doença de enxerto versus hospedeiro. No entanto, há um período mais longo de neutropenia e trombocitopenia e, infelizmente, um maior nível de mortalidade pós-transplante de 100 dias. Um longo período de recuperação dos granulócitos sanguíneos periféricos e plaquetas pode ser devido a insuficiente diferenciação de subpopulações individuais de células positivas para CD34 de sangue do cordão umbilical, como evidenciado pelo baixo nível de absorção de rodamina radioactivos e baixa expressão de antigénios CD38 na sua superfície.

Ao mesmo tempo, o transplante de células-tronco hematopoiéticas do sangue de cordão umbilical de pacientes adultos, realizados, devido à falta de tanto um doador de medula óssea não relacionado compatível, bem como oportunidades para mobilizar autólogo HSC mostraram sobrevivência isenta de recaídas alta anual em pacientes com idade inferior a 30 anos (73%) . A expansão da faixa etária dos receptores (18-46 anos) resultou em uma diminuição da taxa de sobrevivência para 53%.

A análise quantitativa de células com o fenótipo do sangue da medula óssea e do cordão CD34 + apresentaram maior (3,5 vezes) o seu conteúdo na medula óssea, mas o sangue do cordão umbilical mostrou uma predominância significativo de células com o perfil fenotípico das células CD34 + HLA-DR .Izvestno, marcadores chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + O HLA-DR prolifera mais ativamente do que as células com imunofenótipos CD34 + HLA-DR +, o que é confirmado em estudos experimentais do crescimento da cultura de células hematopoiéticas de longo prazo in vitro. Progenitores de células primitivas com o fenótipo de células CD34 + CD38 contido no sangue do cordão umbilical e da medula óssea, mas as células de sangue do cordão umbilical, com o marcador CD34 + CD38 definido têm maior actividade clonogénico de células hematopoiéticas do mesmo fenótipo, isoladas a partir da medula óssea do dador adulto. Além disso, as células de sangue do cordão umbilical com células CD34 + CD38 imunofenotipagem irão proliferar em resposta à estimulação com citoquinas (IL-3, IL-6, G-CSF) e reproduzir 7 vezes mais colónias nas culturas a longo prazo do que as células da medula óssea.

Bancos de células-tronco do cordão umbilical

Para o desenvolvimento adequado de um novo campo de medicina prática - o transplante de células estaminais do sangue do cordão umbilical, bem como para o transplante de células-tronco hematopoiéticas da medula óssea, é necessário ter uma rede ramificada de bancos de sangue já estabelecida nos EUA e na Europa. As redes intra-estaduais de bancos de sangue do cordão umbilical são unidas pela Associação dos Bancos Netcord. A conveniência de criar uma associação internacional de bancos de sangue do cordão umbilical é determinada pelo fato de que, para realizar transplantes não relacionados, é necessário um grande número de amostras de cordão umbilical, que permite selecionar um dador HLA-idêntico. Somente o estabelecimento de um sistema de bancos com o armazenamento de amostras de sangue de diferentes tipos de HLA neles pode realmente resolver o problema de encontrar o doador necessário. A organização de tal sistema de bancos de sangue do cordão umbilical requer o desenvolvimento preliminar de normas éticas e legais, que atualmente estão sendo discutidas no nível internacional.

Para criar bancos de sangue do cordão umbilical na Ucrânia, é necessário elaborar uma série de disposições e documentos.

Em primeiro lugar, são questões de padronização dos métodos de amostragem, fracionamento e congelamento do sangue do cordão umbilical. É necessário regular as regras para a amostragem de sangue do cordão umbilical em maternidades de acordo com os requisitos da ética médica, para determinar a quantidade mínima de sangue do cordão umbilical que assegura o transplante bem-sucedido. É necessário comparar e padronizar vários critérios para avaliação da qualidade e quantidade de células progenitoras hematopoiéticas, bem como métodos de digitação de HLA e métodos para o diagnóstico de doenças genéticas e infecciosas que podem ser transmitidas por infusão de células do sangue do cordão umbilical e estabelecimento de critérios gerais para seleção de doadores saudáveis. Também vale a pena discutir a criação de instalações de armazenamento separadas para soro, células e DNA derivado do sangue do cordão umbilical.

É absolutamente necessário organizar uma rede informática de dados sobre o sangue do cordão umbilical para a implementação do relacionamento com os registros dos dadores da medula óssea. Para desenvolver o transplantologia celular, devem ser desenvolvidos protocolos especiais para comparar os resultados do transplante de sangue do cordão umbilical e da medula óssea de parentes idênticos ao HLA e doadores não relacionados. Na solução de problemas éticos e legais da aplicação clínica de células do cordão umbilical, a padronização da documentação, incluindo o consentimento informado dos pais e a notificação da mãe ou parentes sobre as doenças genéticas e / ou infecciosas da criança, podem ajudar.

A condição decisiva para o desenvolvimento do transplantologia celular na Ucrânia será a adoção do Programa Nacional de Doação de Células Monetais e o desenvolvimento de cooperação internacional com outros países através da Associação Mundial de Doadores de Mediação (WMDA), do Programa Medular Nacional de Doadores dos Estados Unidos (NMDP) e de outros registros.

Generalizando ainda curta história de transplante de células estaminais hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical, nota-se que a primeira hipótese da possibilidade de aplicação clínica de sangue do cordão umbilical, feito no início dos anos 70, foram confirmados nos 80 anos, os resultados de estudos experimentais em animais, e em 1988 o primeiro transplante mundial de células formadoras de sangue do sangue do cordão umbilical para um homem já foi conduzido, após o que foi criada a rede mundial de bancos de sangue do cordão umbilical. Depois de 10 anos, o número de pacientes com células hematopoiéticas transplantadas, umbilical mais perto do sangue do cordão a 800. Entre eles eram pacientes com várias doenças de tumor (leucemia, linfoma, tumores sólidos) e não-tumoral (imunodeficiência congénita, anemia, doenças associadas a desordens metabólicas) natureza.

No sangue do cordão umbilical, o conteúdo de progenitores celulares precoce e comprometido é maior do que no sangue periférico de um adulto. Pelo número de unidades formadoras de colônias de granulócitos e macrófagos e seu potencial proliferativo, o sangue do cordão umbilical excede significativamente o sangue periférico de adultos, mesmo após a introdução de fatores de crescimento. Nas culturas de células a longo prazo in vitro, houve uma maior atividade proliferativa e viabilidade das células do sangue do cordão umbilical do que as células da medula óssea. Momentos críticos no transplante de células-tronco do sangue do cordão umbilical são o número e o potencial hemopoiético das células nucleadas, a presença de infecção por citomegalovírus, compatibilidade HLA do doador e do receptor, peso corporal e idade do paciente.

No entanto, o transplante de células estaminais do sangue do cordão umbilical deve ser considerado como uma alternativa ao transplante de medula óssea para tratar doenças graves do sangue, especialmente em crianças. Os problemas clínicos de transplante de células do sangue do cordão umbilical são gradualmente resolvidos - já existem métodos bastante eficazes de amostragem, separação e criopreservação de células do sangue do cordão umbilical, são fornecidas condições para a formação de bancos de sangue do cordão umbilical, os métodos para testar células nucleadas são melhorados. Otimizado para a separação com uma aquisição em larga escala de células-tronco hematopoiéticas de sangue do cordão umbilical quando a criação de bancos deve ser considerada como solução de gelatina a 3% e 6% de solução de hidroxietil amido.

Perehrestenko P. Et al (2001), com razão de salientar que o transplante de células-tronco do sangue do cordão deve tomar o seu lugar nas medidas terapêuticas complexos para ultrapassar a depressão da hematopoiese de várias origens, como sangue do cordão GSK diferem em um número significativo de vantagens, entre as quais importante é a relativa facilidade de colheita, nenhum risco para o doador, baixa contaminação de células neonatais por vírus e um custo relativamente baixo de transplante. Alguns autores sugerem que o transplante de células de sangue de cordão umbilical menos frequentemente do que as células da medula óssea é acompanhada por complicações associadas com a reacção de "enxerto versus hospedeiro", o que é devido, em sua opinião, a uma fraca expressão nas células do sangue do cordão de antigénios HLA-DR e os seus imaturidade. No entanto, a população principal de células nucleadas de sangue do cordão umbilical são os linfócitos T (células de SDZ-positivo), cujo conteúdo é de cerca de 50%, o que é 20% menos do que no sangue periférico de um adulto, mas as diferenças fenotípicas de subpopulações de células T a partir destas As fontes são insignificantes.

Entre os fatores que afetam diretamente a taxa de sobrevivência do transplante de células estaminais do sangue do cordão umbilical, deve-se notar a idade dos pacientes (os melhores resultados são observados em receptores com idade entre 5 e 5 anos), diagnóstico precoce da doença e a forma de leucemia (a eficácia é muito maior com leucemia aguda). De grande importância são a dose de células de sangue do cordão umbilical nucleadas, bem como a compatibilidade de HLA com o receptor. Não é coincidência que a análise da eficácia clínica do transplante de sangue do cordão HSC em oncohematologia ateste os melhores resultados do tratamento com enxertos relacionados: a sobrevida sem recorrência anual neste caso atinge 63%, enquanto em transplantes não relacionados - apenas 29%.

Assim, a presença de um grande número de células estaminais no sangue do cordão e alta capacidade repopulyatsionnaya células estaminais hematopoiéticas neonatais torná-las adequadas para transplante alogénico em pacientes com malignidades hematológicas. No entanto, note que o recapitulação da hematopoiese após transplante de células estaminais hematopoiéticas do sangue do cordão umbilical "é esticada no tempo": restauração de conteúdo em neutrófilos do sangue periférico geralmente ocorre no final da sexta semana, e fenómeno trombocitopenia desaparecer, geralmente ao fim de 6 meses. Além disso, as células formadoras de sangue imaturos de sangue do cordão umbilical não exclui conflito imunolico: curso severo do "enxerto versus hospedeiro" aguda e crónica de reacção observada, respectivamente, em 23 e 25% dos receptores. As taxas de leucemia aguda no final do primeiro ano após o transplante de células do sangue do cordão umbilical são observadas em 26% dos casos.

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