Vírus da hepatite A

A hepatite A viral é uma doença infecciosa humana caracterizada por um dano hepático predominante e manifesta a intoxicação clinica e a icterícia. O vírus da hepatite A foi detectado em 1973 por S. Feinstone (e outros) usando o método de microscopia eletrônica imune e infectando macacos - chimpanzés e sagüis. A essência do método de microscopia eletrônica imune é que os anticorpos específicos (soro de convalescente) são adicionados ao filtrado das fezes do paciente com hepatite A e o precipitado é submetido a microscopia eletrônica. Devido à interação de vírus com anticorpos específicos, eles são submetidos a agregação específica. Nesse caso, eles são mais fáceis de detectar e a agregação sob a influência de anticorpos confirma a especificidade do patógeno. A descoberta de S. Feinstone foi confirmada em experimentos em voluntários.

O vírus da hepatite A tem uma forma esférica, o diâmetro do virião é de 27 nm. O genoma é representado por um ARN positivo de cadeia simples com uma massa de 2.6 MD. Supercapsid está ausente. O tipo de simetria é cúbico - icosaedro. A cápside possui 32 capsómeros, é formada por quatro polipéptidos (VP1-VP4). Por suas propriedades, o vírus da hepatite A pertence ao gênero Heparnovirus, a família Picornaviridae. Antigenicamente, o vírus da hepatite A (vírus HAV - hepatite A) é homogêneo. HAV se multiplica bem no corpo de chimpanzés, babuínos, hamadryls e macacos (sagüis). Durante muito tempo, o vírus não podia cultivar. Somente na década de 1980. Foi possível obter culturas de células em que HAV se propaga. Inicialmente, para esses propósitos, foram utilizadas linhas de rim transplantadas do rim de rhesus (cultura FRhK-4) e agora - a linha transplantada de células de rim de macacos verdes (cultura 4647).

De acordo com as recomendações dos especialistas da OMS, foi adotada a seguinte nomenclatura de marcadores do vírus da hepatite A: vírus da hepatite A - anticorpos NAU contra o vírus da hepatite A: IgM anti-NAV e IgG anti-NAV.

HAV é partículas pequenas com um diâmetro de 27-30 nm, com simetria icosaédrica e possuindo homogeneidade. No padrão de difracção de elétrons obtido pelo método de agregação imune, são detectadas partículas densas de elétrons com capsómeros dispostos simetricamente localizados superficialmente. Com contraste negativo, as partículas completas e vazias são detectadas nas preparações. O Nucleocapsid NAV, ao contrário do da gripe, não possui protrusão superficial e membranas. Também é importante que o Virion HAV não tenha uma estrutura em forma de coração.

De acordo com suas propriedades físico-químicas do vírus da hepatite A está relacionada com a família de Picornaviridae, gênero Enterovirus com número atômico 72. No entanto, essa taxonomia era muito incomum, e da OMS descobriram que era possível deixar a terminologia "vírus da hepatite A".

Como todos os vírus da família Picornaviridae, o vírus da hepatite A contém ácido ribonucleico. Alguns laboratórios mostraram a possibilidade de clonagem do genoma do vírus da hepatite A, o que abre a perspectiva de obter preparações de vacina.

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Resistência do vírus da hepatite A

O vírus é relativamente resistente a altas temperaturas, ácidos, solventes de gordura (não há lipídios), desinfetantes, ele tolera um poço de baixa temperatura. Tudo isso contribui para a sua preservação a longo prazo no ambiente externo. À temperatura ambiente, sobrevive por várias semanas, a 60 ° C, perde parcialmente a infecciosidade após 4-12 horas, completamente - após alguns minutos a 85 ° C. Altamente resistente ao cloro, devido ao qual é capaz de penetrar na água da torneira através das barreiras das estações de tratamento de água.

Resumindo todos os dados, podemos caracterizar o vírus da hepatite A da seguinte forma:

• O mestre natural é homem;
• animais experimentais - marmozet, chimpanzé;
• fonte de infecção - fezes;
• doença - epidemia e endêmica;
• a via de transmissão é fecal-oral;
• período de incubação - 14 a 40 dias;
• transição para hepatite crônica - não observada.

As propriedades imunológicas do NAV são as seguintes:

• Estirpes de prototipos - Ms-l, CR-326, GVG. Todos são imunologicamente similares ou idênticos;
• Anticorpos - IgM e IgG, são produzidos em resposta à introdução de proteínas estruturais do vírus e são protetores;
• I A ação trófica da i-globulina de soro humano - protege ou atenua a doença sob a condição de administração antes da infecção ou durante o período de incubação.

As características físico-químicas da NAU são as seguintes:

• A morfologia é uma partícula esférica não-shell com simetria cúbica, a cápside consiste em 32 capsómeros;
• O diâmetro é de 27 a 30 nm;
• A densidade em CsCl (g / cm3) é 1,38-1,46 (partículas abertas), 1,33-1,34 (virião maduro), 1,29-1,31 (viriões imaturos, partículas vazias);
• O coeficiente de sedimentação é 156-160 viriões maduros;
• Ácido nucleico - RNA simples, de cadeia simples;
• Peso molecular relativo - 2,25 106-2,8 106KD;
• O número de nucleotídeos é de 6.500-8.100.

A estabilidade do NAV em efeitos físico-químicos é a seguinte:

• Clorofórmio, éter - é estável;
• Cloro, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - inativação parcial;
• Cloramina, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - inactivação completa;
• Formalina, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 horas - inativação completa, 1: 350, 20 ° С, 60 min - inativação parcial.

Temperatura:

• 20-70 ° C - estável;
• 56 ° С, 30 minutos - é estável;
• 60 ° С, 12 horas - inativação parcial;
• 85 ° С, 1 min - inativação total;
• Autoclave, 120 ° C. 20 minutos - inativação completa;
• Calor seco, 180 ° C, 1h - completa inativação;
• UV, 1,1 W, 1 min - completa inativação.

Os dados apresentados mostram que as propriedades físico-químicas do vírus da hepatite A são as mais próximas a enterovírus. Como outros enterovírus, o HAV é resistente a muitas soluções desinfectantes, completamente inativado durante vários minutos a 85 ° C e autoclavado.

Está provado que o vírus da hepatite A pode ser reproduzido em linhas de cultura monocamada primária e transplante de células humanas e de macaco. É observada uma reprodução especialmente ativa do vírus da hepatite A em culturas in vitro quando se utilizam extratos de fígado de pacientes de macaco como material de partida. No entanto, deve notar-se que, em todas as experiências sobre a reprodução do vírus da hepatite A em culturas in vitro, um longo período de incubação em passagens primárias (até 4-10 semanas) atrai a atenção, no futuro o acúmulo de material genético viral está aumentando, mas os valores absolutos permanecem muito insignificante, o que dá razão a muitos pesquisadores para falar sobre a replicação incompleta do vírus da hepatite A em culturas de tecidos.

Resumindo os dados da literatura sobre a reprodução do vírus da hepatite A de culturas não-raiz, pode-se dizer que o fato de uma experiência prolongada de HAV in vitro é inquestionável. As condições ideais para um alto nível estável de replicação viral não foram finalmente identificadas, o que restringe o estudo de suas propriedades biológicas, a produção de uma fonte de reagentes para a produção de diagnósticos e o desenho de vacinas.

Ao mesmo tempo, julgamentos mais otimistas sobre esse problema podem ser encontrados na literatura. A solução de todas as questões relacionadas ao cultivo do vírus da hepatite A é uma questão para o futuro próximo. Ao estudar as condições ideais para a reprodução de HAV na cultura de células de rim do embrião macaco-rhesus, foram identificadas duas fases: a fase de produção do vírus infeccioso (até 6-8 dias ao nível da 5ª passagem) e a fase de acumulação intensiva do antígeno viral. Também é demonstrado que a acumulação mais significativa do antígeno viral ocorre sob as condições do chamado cultivo de rolos (garrafas rotativas). Desta forma, abre grandes possibilidades de obtenção de um antígeno cultural em grandes quantidades e, conseqüentemente, aparecerá um material de partida para a preparação de sistemas de diagnóstico e o fabrico de preparações de vacinas.

Epidemiologia da hepatite A

O vírus da hepatite A possui uma alta patogenicidade para os seres humanos. De acordo com a conclusão da OMS (1987), para o início da doença, é suficiente infectar apenas um virião. No entanto, a dose infecciosa prática é provavelmente muito maior. A fonte de infecção é apenas uma pessoa infectada. O vírus é liberado em grandes quantidades com fezes 12-14 dias antes do aparecimento de icterícia e dentro de 3 semanas. Período icteric. Não foram identificadas diferenças significativas no isolamento do patógeno em pacientes com icterica, icterícia e formas assintomáticas de hepatite A. O método de infecção é fecal-oral, principalmente aquoso, e também por rotas domésticas e alimentares. O método de infecção é fecal-oral, principalmente aquoso, e também por rotas domésticas e alimentares. A principal (principal) rota de transmissão do vírus é a água. Também é possível uma infecção transmitida pelo ar. A susceptibilidade da população é universal. Principalmente crianças menores de 14 anos estão doentes. A doença tem uma sazonalidade outono-inverno pronunciada.

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Sintomas da hepatite A

O período de incubação varia de 15 a 50 dias, o que depende da quantidade da dose infectante do vírus, mas em média é de 28 a 30 dias. Uma vez no corpo, vírus da hepatite A replica nos gânglios linfáticos regionais, para o sangue e, em seguida, para as células do fígado e provoca a hepatite aguda difusa que é acompanhada por lesões de hepatócitos do fígado e células reticuloendoteliais e uma diminuição nas suas funções de desintoxicação e de barreira. O dano aos hepatócitos não ocorre devido à ação direta do vírus, mas como resultado de mecanismos imunopatológicos. A imagem mais típica da hepatite A é forma aguda ictérica cíclico: o período de incubação, o pródromo (preicteric), icterícia e período de convalescença. No entanto, nos focos de infecção revela um grande número de pacientes com formas assintomáticos e anictéricos de infecção, o número dos quais predomina sobre ictérica ( "fenómeno iceberg").

A imunidade pós-infecciosa é forte e duradoura, causada por anticorpos neutralizadores de vírus e células de memória imune.

Diagnóstico microbiológico da hepatite A

O diagnóstico de hepatite A (com excepção dos animais de infecção - chimpanzés marmozet, babuínos, que nós) com base em vários métodos imunológicos: método de imunofluorescência DGC, hemaglutinação aderência imune (complexo de antigénio virai + anticorpo na presença de complemento adsorvido em eritrócitos e provoca a sua aderência) . No entanto, a aplicabilidade destes métodos é limitada devido à falta de antigénios virais específicos e reacção de imunofluorescência requer biópsias do fígado, o que é indesejável. Confiável e específico é o método de microscopia eletrônica imune, mas é muito laborioso. Portanto, até que o único método aceitável para a reacção imunológica é o ensaio imunossorvente em fase sólida, sob a forma de IPM, ou rebordo, especialmente na modificação de "captura" de imunoglobulina M. No nosso país para este sistema de teste finalidade proposta - "diag-A-GEO". O princípio de funcionamento deste sistema de teste é o seguinte. Nas paredes de poliestireno lunochek sorvido primeiros anticorpos para imunoglobulinas de classe H (M antiimmunoglobuliny) é então adicionado para o soro do paciente investigado. Se houver classe de anticorpos IgM, que se ligarão a um anticorpo-Ti-M, em seguida, adicionado a um antigénio particular viral (vírus da hepatite A), que é obtido por crescimento em cultura de células. O sistema é lavado e são adicionados anticorpos antivirais marcados com peroxidase de rábano. Se os quatro componentes do sistema interagem, surge um "sanduíche de quatro camadas":

• antiimmunoglobulinas M,
• imunoglobulinas M (contra o vírus da hepatite A - no soro de teste do paciente),
• antígeno viral
• Anticorpos antivirais marcados com uma enzima.

Para detectar este complexo, um substrato para a enzima é adicionado às lunetas. Sob a influência da enzima, é destruída e um produto colorido é formado. A intensidade da cor pode ser medida quantitativamente com um espectrofotômetro ou fotocolorímetro.

A vantagem do método de "captura" de IgM é que os anticorpos desta classe de imunoglobulinas aparecem na resposta imune primária e indicam um estágio ativo da infecção, eles desaparecem após a doença transferida . Os anticorpos antivirais pertencentes à classe de IgG, em contraste, persistem por um longo período após a doença, proporcionando a imunidade adquirida. Para a detecção do vírus da hepatite A, é proposto um método de sonda de DNA: uma sonda de ARNv complementar é utilizada como uma sonda.

Tratamento da hepatite A

Devido ao fato de que a produção de interferão é interrompida na hepatite viral, o tratamento da hepatite A é baseado no uso de interferão e indutor de sua amixina de síntese endógena.

Prevenção específica da hepatite A

Anteriormente amplamente aplicado hepatite seroprevention Um gamaglobulina usando não se justifica, no entanto, a ênfase foi colocada sobre a imunização realização, realizada a vacinação contra hepatite A. Para este fim, várias variantes de vacinas estão sendo desenvolvidas e já estão sendo usadas. Na Rússia, uma vacina efetiva contra a hepatite A foi obtida em 1995 e agora foi aplicada com sucesso.