Vírus da hepatite A

A hepatite viral A é uma doença infecciosa humana, caracterizada principalmente por danos no fígado e clinicamente manifestada por intoxicação e icterícia. O vírus da hepatite A foi descoberto em 1973 por S. Feinstone (et al.) usando o método de microscopia eletrônica imunológica e infectando macacos - chimpanzés e saguis. A essência do método de microscopia eletrônica imunológica é que anticorpos específicos (soro convalescente) são adicionados ao filtrado das fezes de um paciente com hepatite A e o sedimento é submetido à microscopia eletrônica. Devido à interação dos vírus com anticorpos específicos, eles sofrem agregação específica. Nesse caso, são mais fáceis de detectar, e a agregação sob a influência de anticorpos confirma a especificidade do patógeno. A descoberta de S. Feinstone foi confirmada em experimentos com voluntários.

O vírus da hepatite A é esférico, o diâmetro do vírion é de 27 nm. O genoma é representado por RNA positivo de fita simples com mm 2,6 MD. Não há supercapsídeo. O tipo de simetria é cúbico - icosaedro. O capsídeo tem 32 capsômeros, é formado por quatro polipeptídeos (VP1-VP4). De acordo com suas propriedades, o vírus da hepatite A pertence ao gênero Heparnovirus, a família Picornaviridae. Em termos de antígenos, o vírus da hepatite A (HAV - vírus da hepatite A) é homogêneo. O HAV se reproduz bem no corpo de chimpanzés, babuínos, babuínos hamadryas e macacos saguis. Por muito tempo, o vírus não pôde ser cultivado. Somente na década de 1980 foi possível obter culturas de células nas quais o HAV se reproduz. Inicialmente, linhas celulares contínuas de rim de embrião de macaco rhesus (cultura FRhK-4) foram usadas para esses propósitos, e agora uma linha celular contínua de células renais de macaco verde (cultura 4647) é usada.

De acordo com as recomendações dos especialistas da OMS, foi adotada a seguinte nomenclatura de marcadores do vírus da hepatite A: vírus da hepatite A - HAV anticorpos para o vírus da hepatite A: anti-HAV IgM e anti-HAV IgG.

O HAV é uma partícula pequena com diâmetro de 27-30 nm, com simetria icosaédrica e homogeneidade. O eletrograma obtido pelo método de imunoagregação revela partículas eletrodensas com capsômeros superficialmente localizados e simetricamente dispostos. Com contraste negativo, partículas cheias e vazias são reveladas nas preparações. O nucleocapsídeo do HAV, diferentemente do da influenza, não possui saliências superficiais nem membrana. Também é importante que o vírion do HAV não tenha uma estrutura em forma de coração.

Com base em suas propriedades físico-químicas, o vírus da hepatite A é classificado como pertencente à família dos picornavírus, gênero enterovírus com número de série 72. No entanto, essa taxonomia se mostrou muito incomum, e a OMS considerou possível manter a terminologia “vírus da hepatite A”.

Como todos os vírus da família Picornaviridae, o vírus da hepatite A contém ácido ribonucleico. Alguns laboratórios demonstraram a possibilidade de clonar o genoma do vírus da hepatite A, o que abre a perspectiva de obtenção de vacinas.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Resistência ao vírus da hepatite A

O vírus é relativamente resistente a altas temperaturas, ácidos, solventes de gordura (sem lipídios), desinfetantes e tolera bem baixas temperaturas. Tudo isso contribui para sua preservação a longo prazo no ambiente externo. À temperatura ambiente, sobrevive por várias semanas; a 60 °C, perde parcialmente sua infectividade após 4 a 12 horas; e a 85 °C, perde completamente sua infectividade após alguns minutos. É altamente resistente ao cloro, o que lhe permite penetrar na água da torneira através das barreiras das estações de tratamento de água.

Resumindo todos os dados, podemos caracterizar o vírus da hepatite A da seguinte forma:

• o hospedeiro natural é o homem;
• animais experimentais - saguis, chimpanzés;
• a fonte de infecção são as fezes;
• a doença é epidêmica e endêmica;
• via de transmissão: fecal-oral;
• período de incubação - 14-40 dias;
• transição para hepatite crônica - não observada.

As propriedades imunológicas do HAV são as seguintes:

• Cepas prototípicas - Ms-1, CR-326, GВG. Todas são imunologicamente semelhantes ou idênticas;
• Os anticorpos - IgM e IgG, são produzidos em resposta à introdução de proteínas estruturais do vírus e são protetores;
• I. O efeito protetor da gamaglobulina sérica humana - previne ou atenua a doença se administrada antes da infecção ou durante o período de incubação.

As características físico-químicas do NAU são as seguintes:

• Morfologia: partícula esférica sem casca com simetria cúbica, capsídeo constituído por 32 capsômeros;
• Diâmetro - 27-30 nm;
• Densidade em CsCl (g/cm3) - 1,38-1,46 (partículas abertas), 1,33-1,34 (vírion maduro), 1,29-1,31 (vírions imaturos, partículas vazias);
• Coeficiente de sedimentação - 156-160 vírions maduros;
• O ácido nucleico é um RNA linear de fita simples;
• Peso molecular relativo - 2,25 106-2,8 106KD;
• O número de nucleotídeos é de 6.500-8.100.

A estabilidade do HAV sob influências físicas e químicas é a seguinte:

• Clorofórmio, éter - estável;
• Cloro, 0,5-1,5 mg/l, 5 °C, 15 min - inativação parcial;
• Cloramina, 1 g/l, 20 °C, 15 min - inativação completa;
• Formalina, 1:4000, 35-37 °C, 72 h - inativação completa, 1:350, 20 °C, 60 min - inativação parcial.

Temperatura:

• 20-70 °C - estável;
• 56 °C, 30 min - estável;
• 60 °C, 12 h - inativação parcial;
• 85 °C, 1 min - inativação completa;
• Autoclavagem, 120 °C. 20 min - inativação completa;
• Calor seco, 180 °C, 1 hora - inativação completa;
• UFO, 1,1 W, 1 min - inativação completa.

Os dados apresentados mostram que, em suas propriedades físico-químicas, o vírus da hepatite A é o mais próximo dos enterovírus. Assim como outros enterovírus, o HAV é resistente a diversas soluções desinfetantes e é completamente inativado em poucos minutos a 85 °C e em autoclave.

Foi comprovado que o vírus da hepatite A pode se reproduzir em linhagens primárias e contínuas de monocamadas de culturas de células humanas e de macacos. Observa-se uma reprodução particularmente ativa do vírus da hepatite A em culturas in vitro quando se utilizam extratos de fígado de macacos doentes como material de partida. Deve-se notar, no entanto, que em todos os experimentos sobre a reprodução do vírus da hepatite A em culturas in vitro, chama-se a atenção para o longo período de incubação durante as passagens primárias (até 4 a 10 semanas). Posteriormente, o acúmulo de material genético viral aumenta, mas os valores absolutos permanecem muito insignificantes, o que justifica que muitos pesquisadores falem de replicação incompleta do vírus da hepatite A em culturas de tecidos.

Resumindo os dados da literatura sobre a reprodução do vírus da hepatite A em culturas extrateciduais, pode-se afirmar que a sobrevivência a longo prazo do VHA in vitro é inquestionável. As condições ideais para um alto nível estável de replicação viral ainda não foram identificadas, o que dificulta o estudo de suas propriedades biológicas, a obtenção de uma fonte de reagentes para a produção de diagnósticos e o desenvolvimento de vacinas.

Ao mesmo tempo, julgamentos mais otimistas sobre esse problema podem ser encontrados na literatura. A solução de todas as questões relacionadas ao cultivo do vírus da hepatite A é uma questão de futuro próximo. Ao estudar as condições ótimas para a reprodução do HAV na cultura de células renais embrionárias do macaco rhesus, duas fases foram identificadas: a fase de produção do vírus infeccioso (até 6-8 dias no nível da 5ª passagem) e a fase de acúmulo intensivo do antígeno viral. Também foi demonstrado que o acúmulo mais significativo do antígeno viral ocorre sob as condições do chamado cultivo em rolo (frascos rotativos). Este método abre amplas oportunidades para a obtenção de antígenos culturais em grandes quantidades e, consequentemente, surgirá o material de origem para a preparação de sistemas de diagnóstico e a fabricação de vacinas.

Epidemiologia da hepatite A

O vírus da hepatite A é altamente patogênico para humanos. De acordo com a OMS (1987), a infecção com apenas um vírion é suficiente para causar a doença. No entanto, a dose infecciosa prática é provavelmente muito maior. A única fonte de infecção é uma pessoa infectada. O vírus é excretado em grandes quantidades com fezes 12-14 dias antes do início da icterícia e durante as 3 semanas do período ictérico. Não foram encontradas diferenças significativas na excreção do patógeno em pacientes com formas ictéricas, anictéricas e assintomáticas de hepatite A. A via de infecção é fecal-oral, principalmente transmitida pela água, bem como doméstica e alimentar. A principal via (primária) de transmissão do vírus é transmitida pela água. A infecção por gotículas aéreas também é possível. A suscetibilidade da população é universal. Principalmente crianças menores de 14 anos são afetadas. A doença tem uma pronunciada sazonalidade outono-inverno.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Sintomas da Hepatite A

O período de incubação varia de 15 a 50 dias, dependendo da dose infecciosa do vírus, mas em média é de 28 a 30 dias. Uma vez no corpo, o vírus da hepatite A multiplica-se nos linfonodos regionais, penetra na corrente sanguínea e, em seguida, nas células hepáticas, causando hepatite difusa aguda, que é acompanhada por danos aos hepatócitos e aos elementos reticuloendoteliais do fígado e por uma diminuição das suas funções de desintoxicação e barreira. Os danos aos hepatócitos não ocorrem devido à ação direta do vírus, mas sim como resultado de mecanismos imunopatológicos. O quadro mais típico da hepatite A é uma forma cíclica ictérica aguda: período de incubação, período prodrômico (pré-ictérico), período ictérico e convalescença. No entanto, nos focos de infecção, é detectado um grande número de pacientes com formas anictéricas e assintomáticas de infecção, cujo número predomina significativamente sobre as ictéricas ("fenômeno iceberg").

A imunidade pós-infecção é forte e duradoura, causada por anticorpos neutralizantes de vírus e células de memória imunológica.

Diagnóstico microbiológico da hepatite A

O diagnóstico da hepatite A (exceto para a infecção de animais como chimpanzés, saguis e babuínos, que não possuímos) baseia-se em vários métodos imunológicos: RSC, método de imunofluorescência e hemaglutinação de adesão imune (o complexo antígeno viral + anticorpo, na presença de complemento, é adsorvido nos eritrócitos e causa sua adesão). No entanto, as possibilidades de utilização desses métodos são limitadas devido à falta de antígenos virais específicos, e a reação de imunofluorescência requer biópsia hepática, o que é indesejável. O método de microscopia eletrônica imunológica é confiável e específico, mas exige muito trabalho. Portanto, até o momento, a única reação imunológica aceitável é o método de análise imunossorvente da fase sólida na forma de IFM ou RIM, especialmente na modificação de "captura" de imunoglobulinas da classe M. Em nosso país, foi proposto um sistema de teste para esse fim - "DIAGN-A-HEP". O princípio de funcionamento deste sistema de teste é o seguinte. Primeiramente, anticorpos contra imunoglobulinas da classe M (antiimunoglobulinas M) são adsorvidos nas paredes de poços de poliestireno e, em seguida, o soro do paciente a ser testado é adicionado. Se contiver anticorpos IgM, estes se ligarão aos antianticorpos da classe M. Em seguida, um antígeno viral específico (vírus da hepatite A) é adicionado, obtido por cultivo em cultura celular. O sistema é lavado e anticorpos antivirais marcados com peroxidase de raiz-forte são adicionados a ele. Se todos os quatro componentes do sistema interagirem, um "sanduíche" de quatro camadas é formado:

• antiimunoglobulinas M,
• imunoglobulinas M (contra o vírus da hepatite A - no soro do paciente em estudo),
• antígeno viral,
• anticorpos antivirais marcados com enzimas.

Para detectar esse complexo, um substrato para a enzima é adicionado aos poços. Sob a influência da enzima, ele é destruído, formando um produto colorido. A intensidade da cor pode ser medida quantitativamente usando um espectrofotômetro ou fotocolorímetro.

A vantagem do método de "captura" de IgM é que os anticorpos dessa classe de imunoglobulinas aparecem durante a resposta imune primária e indicam o estágio ativo da infecção, desaparecendo após o início da doença. Os anticorpos antivirais pertencentes à classe IgG, por outro lado, persistem por muito tempo após o início da doença, conferindo imunidade adquirida. Um método de sonda de DNA foi proposto para detectar o vírus da hepatite A: o DNA complementar de vRNA é usado como sonda.

Tratamento da hepatite A

Devido ao fato de a produção de interferon ser interrompida na hepatite viral, o tratamento da hepatite A é baseado no uso de interferon e do indutor de sua síntese endógena, a amixina.

Prevenção específica da hepatite A

A soroprofilaxia da hepatite A com gamaglobulina, amplamente utilizada anteriormente, não se justificava, portanto, a ênfase principal foi colocada na realização da profilaxia vacinal, sendo a vacinação contra a hepatite A realizada. Para esse fim, diversos tipos de vacinas estão sendo desenvolvidos e já estão sendo utilizados. Na Rússia, uma vacina eficaz contra a hepatite A foi obtida em 1995 e agora está sendo utilizada com sucesso.