Imunofenotipagem de hemoblastose

O progresso significativo em estudos hematológicos tem sido associado nos últimos anos com o uso de métodos imunológicos modernos e meios automatizados para análise e triagem de células de citometro de sangue periférico e medula óssea. Morfológica tradicional e estudo citoquímica da doença das células de substrato (sangue, medula vermelha óssea, nódulos linfáticos, baço, etc), em muitos casos, especialmente em doenças linfoproliferativas, não revelam toda a gama de opções de entre formas morfologicamente semelhantes e identificar a origem do clone patológico . Esses problemas podem ser resolvidos apenas estudando as características imunológicas das células. Cada estágio de diferenciação de células hematopoiéticas corresponde ao seu próprio conjunto de antígenos, que de acordo com a classificação internacional são chamados de diferenciação e são divididos em clusters de diferenciação, denotados CD.

Com mudanças neoplásicas, o bloqueio de diferenciação pode ocorrer em qualquer fase do desenvolvimento celular normal, resultando na formação de um clone de células patológicas que determinam o substrato da doença e possuem a mesma característica imunológica (ou fenotípica). Depois de um estudo de estes marcadores nas células pode ser determinado por qualquer forma ou forma de realização da doença são consistentes, ou seja, na base do diagnóstico fenótipo celular diferencial imunológica, que é o mais difícil em desordens linfoproliferativas, porque as doenças patológicas de células de substrato principal são quase o mesmo tipo de células morfologicamente.

A fenotipagem permite a digitação de células sanguíneas e células maduras da série mielo, mono- e linfocítica usando anticorpos monoclonais pela presença de antígenos de diferenciação (receptores) na parede celular. Na seção "Avaliação do estado imunológico do organismo", as características e o significado diagnóstico dos marcadores celulares são parcialmente descritos; Abaixo está uma breve descrição dos marcadores de células antigênicas aplicados ao diagnóstico de hemoblastose. Nas membranas de células sanguíneas e medula óssea vermelha, os seguintes antígenos (marcadores) podem ser identificados.

• CD2 é uma glicoproteína transmembranar monomérica. Está presente na superfície de todos os linfócitos T circulantes e alguns linfócitos NK. CD2 participa do processo de ativação alternativa de linfócitos T. A detecção de CD2 utilizando anticorpos monoclonais na prática clínica é utilizada para fenotipagem de leucemias de células T agudas, linfomas, condições inflamatórias crônicas e imunodeficiência.
• CD3 - um complexo proteico associado a um receptor de células T específico de antígeno, é o principal marcador funcional de linfócitos T. Facilita a transferência do sinal de ativação da membrana para o citoplasma da célula. A detecção de CD3 é indicada para o diagnóstico de leucemia aguda de células T, linfoma (o CD3 não é expresso em tumores linfoides de células não-T) e doenças de imunodeficiência.
• CD4 é uma glicoproteína transmembranar expressa por uma subpopulação de T-ajudantes (indutores) que constituem 45% dos linfócitos do sangue periférico. Nos estágios iniciais do desenvolvimento de linfócitos no timo, os antígenos CD4, bem como CD8, são expressos por todos os linfócitos corticais. Os timócitos medulares, cujo fenótipo é semelhante às células T CD4 + maduras do sangue periférico (T-ajudantes), já expressam receptores CD4 ou CD8. No sangue periférico, até 5% das células são simultaneamente rotuladas CD4 e CD8. É possível uma leve expressão de CD4 em algumas células de monócitos. O CD4 é expresso na maioria dos casos por linfomas de células T, incluindo micoses de cogumelos, bem como leucemia de células T associadas ao HTLV (HTLV-vírus T-linfotrópico humano).
• CD5 - uma glicoproteína de cadeia simples, presente em todos os linfócitos T maduros e a maioria dos timócitos, é expressivamente expressa pelos linfócitos B. CD5 é detectado em células neoplásicas de leucemia linfocítica crônica de células B e linfoma centrocítico. Em outros tipos de doenças linfoides malignas - linfoma folicular, leucemia de células pilosas, linfoma de células grandes - o CD5 não é expresso.
• O CD7 é uma proteína de cadeia simples, o primeiro marcador de diferenciação de células T. É expressado por linfócitos pró-T mesmo antes de migrar para o timo. O CD7 é detectado na maioria das células NK, observa-se uma expressão fraca em monócitos. Os linfócitos B e os granulócitos não contêm esse antígeno. A definição de CD7 é utilizada para o diagnóstico de linfomas, leucemia linfoblástica de células T de crianças.
• CD8 é uma proteína que consiste em duas cadeias polipeptídicas ligadas por pontes dissulfureto. É expressa por uma subpopulação de linfócitos T citotóxicos e supressores, que compreendem 20-35% dos linfócitos do sangue periférico. Este antígeno também possui linfócitos NK, timócitos corticais, 30% de timocitos medulares e uma subpopulação de células vermelhas da medula óssea. O CD8 é examinado para avaliar quantitativamente o conteúdo do supressor de T (ver secção "T-linfócitos-supressores no sangue" acima).

• CD10 é a endopeptidase associada à membrana celular. CD10 expressa formas jovens de linfócitos B e uma subpopulação de linfócitos corticais. CD10 expressa todas as células de ALL.
• CD11c expressa macrófagos, monócitos, granulócitos, células NK e células de leucemia de células pilosas na membrana celular.
• CD13 é uma glicoproteína expressa por células mielomonocíticas (células progenitoras, neutrófilos, basófilos, eosinófilos, monócitos e células de leucemia mielóide). Está ausente nos linfócitos T, B, eritrócitos e plaquetas.
• CD14 é uma glicoproteína de membrana de superfície. É expressa principalmente por monócitos e macrófagos. CD14 é detectado em mais de 95% de monócitos de sangue periférico e medula óssea. A forte expressão de CD14 é observada na leucemia mieloblástica aguda. Na leucemia linfoblástica aguda e crônica, este antígeno não é expresso.
• O CD15 é um oligossacarídeo. Ele participa dos processos de fagocitose e quimiotaxia. Este antígeno está presente na superfície de granulócitos maduros e células de Berezovsky-Sternberg. A expressão do antígeno CD15 é detectada na doença de Hodgkin. Nos linfomas não Hodgkin, o CD15 não é detectado na maioria dos casos.
• CD16 é expresso na superfície de granulócitos, monócitos, macrófagos e células NK. Todos os linfócitos que expressam esse antígeno possuem a capacidade de citotoxicidade celular dependente de anticorpos. CD16 é determinado ao digitar leucemias mielocíticas crônicas, para caracterizar células NK.
• CD19 é uma glicoproteína presente em todos os linfócitos B periféricos, bem como em todos os precursores de células B. Está ausente nas células plasmáticas. Este é o marcador mais antigo das células B, desempenha um papel importante na regulação da ativação e proliferação de linfócitos B. O CD19 é expresso em todas as células neoplásicas de leucemia aguda de origem de células B e também está presente em algumas formas de leucemia monoblástica aguda.
• CD20 é uma proteína não glicosilada. Na ontogênese dos linfócitos B, o antígeno CD20 aparece após a CD19 no estágio de diferenciação pré-B-célula de linfócitos. Está ausente na membrana plasmática das células plasmáticas. É expressa em ALL, leucemia linfocítica crônica de células B, leucemia de células peludas, linfoma de Burkitt e muito raramente em leucemia monoblástica aguda.
• CD21 é uma glicoproteína, em uma quantidade significativa está presente nos linfócitos B em órgãos linfóides e em pequena quantidade nas células B do sangue periférico. CD21 é um receptor para o vírus Epstein-Barr.
• CD22 é uma proteína que consiste em duas cadeias polipeptídicas. É expresso na membrana da maioria dos linfócitos B, incluindo células progenitoras (pró-hematócitos). O antígeno não é expresso em linfócitos B (células plasmáticas) após sua ativação. A expressão mais pronunciada de CD22 é detectada em células com leucemia de células pilosas, leucemias mieloides fracas e LLA de células não T.
• CD23 é uma glicoproteína expressa por linfócitos B ativados de sangue periférico em maior medida. CD23 medeia citotoxicidade e fagocitose dependentes de IgE por macrófagos e eosinófilos.
• CD25 é uma glicoproteína de cadeia simples identificada como um receptor de baixa afinidade para a IL-2. Este receptor é expresso em linfócitos T ativados e, em menor densidade, em células B ativadas. No sangue periférico de pessoas saudáveis, o antígeno está presente em mais de 5% das células linfóides.
• CD29 é um receptor de fibronectina. É amplamente distribuído em tecidos, é expressado por leucócitos. A detecção de CD29 em células do sangue periférico é usada para tipificar uma subpopulação de células T com o fenótipo CD4 + CD29 +, que são chamados de Auxiliar de Tipo 2 (Th2). Essas células, através da produção de linfocinas, participam da realização da resposta imune humoral.
• CD33 é uma glicoproteína transmembranar. Está presente na superfície das células da série mielóide e monocítica. Encontra-se na superfície de monócitos e, em menor grau, granulócitos de sangue periférico. Aproximadamente 30% das células vermelhas da medula óssea expressam CD33, incluindo mieloblastos, promielócitos e mielócitos. O antígeno está ausente nas membranas de células estaminais pluripotentes. CD33 é usado para caracterizar células em leucemias mielóides. As células de leucemia de origem linfóide e eritroide não expressam CD33.
• CD34 é uma fosfoglicoproteína, expressa por células progenitoras hematopoiéticas, incluindo células estaminais monopotentes. A expressão mais pronunciada de Ar é observada em progenitores iniciais; Quando as células amadurecem, a expressão do marcador cai. O CD34 também é encontrado em células endoteliais. CD34 é usado para caracterizar células em leucemia mielográfica e linfoblástica aguda. Com leucemia linfocítica crônica e linfomas, a expressão do antígeno CD34 não é detectada.

• O CD41a é expresso por plaquetas e megacariócitos. Os anticorpos monoclonais para a detecção de CD41a são utilizados para diagnosticar leucemia megakiarloblástica. Com Glązmann thrombasthenia, a expressão deste antígeno está ausente ou significativamente suprimida.
• CD42b é uma glicoproteína de membrana que consiste em duas cadeias polipeptídicas. O marcador é encontrado na superfície das plaquetas e megacariócitos. Na prática clínica, a detecção de CD42b é utilizada para diagnosticar trombocitopatia - síndrome de Bernard-Soulier.
• CD45RA pertence à classe de glicoproteínas transmembranares. Este é um antígeno leucocitário comum. É expresso na membrana celular dos linfócitos B, em menor grau linfócitos T e em timócitos medulares maduros. O marcador não é expresso pelos granulócitos.
• CD45RO é uma isoforma de baixo peso molecular de CD45RA - um leucócito comum Ag. Eles são encontrados em células T (linfócitos T de memória), subpopulações de linfócitos B, monócitos e macrófagos. Os anticorpos monoclonais para CD45RO interagem com a maioria dos timócitos, uma subpopulação de linfócitos T CD4 + e CD8 + em repouso e células T ativadas maduras. As células de origem mielomonocítica, granulócitos e monócitos também possuem este antígeno. É detectado em linfomas centroblásticos e imunoblásticos.
• Dímero CD46 - O-glicosilado. É amplamente distribuído nos tecidos e é expressado por linfócitos T e B, monócitos, células NK de granulócitos, plaquetas, células endoteliais, fibroblastos, mas ausentes na superfície dos eritrócitos. CD46 fornece proteção de tecido da ação do complemento.
• CD61 é um antígeno de plaquetas. É expresso em plaquetas de sangue periférico e medula óssea vermelha, bem como em megacariócitos e megacariotos. Sua definição é usada como marcador de leucemia megacariótica aguda. A expressão do antígeno está ausente ou suprimida em pacientes com trombastenia de Glanzmann.
• O CD95, também chamado de Fas ou APO-1, é uma glicoproteína transmembranar, um membro da família de receptores do fator de necrose tumoral. É expressa em quantidades significativas em linfócitos T de sangue periférico (CD4 + e CD8 +) e, em menor grau, em linfócitos B e células NK. Este antígeno também é expresso em granulócitos, monócitos, células de tecido e células neoplásicas. A ligação de CD95 ao ligando Fas (CD95L) induz apoptose nas células.
• CD95L, ou ligando de Fas, uma proteína de membrana pertencente à família de receptores do fator de necrose tumoral. Este antigénio é expresso por linfócitos T citotóxicos, células NK e muito frequentemente por células tumorais; o principal indutor da apoptose nas células.
• O HLA-DR é um determinante monomórfico das moléculas de classe II do principal complexo de histocompatibilidade humana (HLA). O marcador é expresso em células de Langerhans, células dendríticas de órgãos linfóides, certos tipos de macrófagos, linfócitos B, células T ativadas e células epiteliais do timo. O teste para este marcador é usado para quantificar linfócitos T ativados com o fenótipo CD3 + HLA-DR +.

Usando uma seleção diferente de anticorpos monoclonais para marcadores, é possível fazer um retrato fenotípico de células característico de uma determinada forma de leucemia.

Além de utilizar as técnicas de imunofenotipagem para o diagnóstico diferencial e diagnóstico de doenças malignas hematológicas, particularmente importante voltaram sua utilização no processo de tratamento para avaliar o estado de remissão e população residual de células leucémicas. Sabendo o "retrato" fenotípica de células blásticas no período de diagnóstico, a estes marcadores pode encontrar clone leucêmica células em remissão, e do aumento do seu número - para prever o desenvolvimento de recaída longa (para 1-4 meses) até suas características clínicas e morfológicas.

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