Reação em cadeia da polimerase (PCR) no diagnóstico de doenças infecciosas

PCR - um dos métodos para diagnóstico de DNA, permitindo aumentar o número de cópias de uma porção detectável do genoma (ADN) de bactérias ou vírus é um milhão de vezes utilizando uma enzima ADN polimerase. O segmento do ácido nucleico testado para um determinado genoma é multiplicado (amplificado) muitas vezes, o que permite que ele seja identificado. Em primeiro lugar, uma molécula de ADN de bactérias ou vírus por aquecimento dividido em duas correntes, em seguida, na presença dos iniciadores de ADN sintetizados (sequência de nucleótidos específicos para o genómico definido) é ligá-los com trechos complementares de ADN, sintetizado a segunda cadeia do ácido nucleico após cada iniciador, na presença de uma polimerase de ADN termoestável . São obtidas duas moléculas de DNA. O processo é repetido muitas vezes. Para o diagnóstico, uma molécula de DNA, ou seja, uma bactéria ou uma partícula viral, é suficiente. A reacção de um passo adicional - a síntese de ADN na molula de ARN utilizando a enzima transcriptase reversa - permitiu testar os vírus de ARN tais como o vírus de HCV. O PCR é um processo de três passos, repetido cíclicamente: desnaturação, recozimento de iniciadores, síntese de DNA (polimerização). A quantidade sintetizada de DNA é identificada por ELISA ou por eletroforese.

A PCR pode ser utilizada em material biológico diferente - soro ou plasma sanguíneo, a raspagem da uretra, biópsia, fluido pleural, fluido cerebroespinhal, etc. A primeira PCR foi utilizado para o diagnóstico de doenças infecciosas, tais como hepatite viral B, da hepatite viral C, da hepatite viral D, infecção por CMV, infecções sexualmente transmitidas infecciosa (gonorreia, diynaya lixo, Mycoplasma, Ureaplasma infecção), tuberculose, VIH - infecção, etc.

A vantagem do PCR no diagnóstico de doenças infecciosas em relação a outros métodos de pesquisa é a seguinte:

• o agente causador da infecção pode ser encontrado em qualquer ambiente biológico do corpo, incluindo o material obtido por biópsia;
• É possível diagnosticar doenças infecciosas nos primeiros estágios da doença;
• uma avaliação quantitativa dos resultados da pesquisa é possível (quantos vírus ou bactérias estão contidos no material em estudo);
• alta sensibilidade do método; por exemplo, a sensibilidade da PCR para detectar o DNA do vírus da hepatite B viral no sangue é de 0,001 pg / ml (aproximadamente 4 × 10 ² cópias / ml), enquanto a sensibilidade do método de hibridação de DNA utilizando sondas ramificadas é de 2,1 pg / ml (aproximadamente 7 × 10 ⁵ cópias / ml).

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