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A PCR como método de diagnóstico de doenças genéticas
Última revisão: 04.07.2025
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A PCR é uma nova conquista da genética molecular, utilizada para amplificação de DNA, e permite a rápida multiplicação in vitro de uma região específica do DNA (ou seja, qualquer gene de interesse) mais de 200.000 vezes. Para realizar a reação, basta ter material de DNA de uma célula; a quantidade de DNA amplificada pela PCR é tão grande que esse DNA pode ser simplesmente corado (o uso de sondas radioativas após a eletroforese não é necessário). Um pré-requisito para a realização da PCR é o conhecimento da sequência de nucleotídeos da região do DNA amplificada para a seleção correta dos primers sintetizados artificialmente.
Atualmente, a PCR é um processo de tubo único que consiste em ciclos repetidos de amplificação (reprodução, cópia) de uma sequência específica de molécula de DNA, a fim de obter um número suficientemente grande de cópias que possam ser identificadas por eletroforese. Um dos principais componentes da reação são os "primers" – oligonucleotídeos sintéticos constituídos por 20 a 30 bases complementares aos "sítios" (áreas) de anelamento (ligação) na área identificada do DNA da matriz.
A PCR ocorre automaticamente em um termostato programável – um termociclador (amplificador). O ciclo de três estágios, que resulta em cópias exatas da seção identificada do DNA da matriz, é repetido de 30 a 50 vezes, de acordo com o programa especificado pelo termociclador. No primeiro ciclo, os oligoprimers hibridizam com o DNA da matriz original e, em seguida (nos ciclos subsequentes), com moléculas de DNA recém-sintetizadas, à medida que se acumulam na mistura de reação. Neste último caso, a síntese de DNA termina não como resultado de uma mudança de temperatura, mas ao atingir o limite da DNA polimerase da seção amplificada, que determina o tamanho da seção de DNA recém-sintetizada com uma precisão de um nucleotídeo.
A eletroforese é utilizada como método de detecção das moléculas de DNA obtidas, com o auxílio da qual o material amplificado é separado de acordo com o tamanho dos amplicons (produtos de amplificação).
A PCR pode ser usada para examinar diretamente os locais de mutações suspeitas ou sítios polimórficos, bem como para estudar a presença de quaisquer outras características específicas do DNA.
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