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Hibridação in situ
Última revisão: 23.04.2024
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O procedimento de hibridação pode ser realizado não só no gel, nos filtros ou na solução, mas também nas preparações histológicas ou cromossômicas. Este método é chamado de hibridização in situ. Uma variante do método em que as preparações de DNA ou RNA marcadas com fluorocromos são utilizadas como sondas é denominada FISH (hipbradização in situ de fluoresceína). A sonda de DNA marcada é aplicada a preparações de cromossomas de metafase de hibridação (desnatados) de forma diferencial e preparada para cromossomas de metafase. O pré-tratamento de cromossomos é usado para facilitar o acesso da sonda ao DNA genômico. Após a lavagem de moléculas de DNA não ligadas e a aplicação de uma emulsão fotossensível (usando um rótulo radioativo) ou realizando um tratamento adequado (usando sondas de DNA marcadas com biotina ou fluoresceína), as localizações de sequências de DNA que são complementares da sonda de DNA usada podem ser detectadas diretamente por microscopia em a forma de pontos característicos sobre as partes correspondentes de certos cromossomos.
Este método de investigação permite determinar não apenas a afiliação cromossômica, mas também a localização intracromossômica do gene sob investigação.
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