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Hibridação in situ
Última revisão: 04.07.2025
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O procedimento de hibridização pode ser realizado não apenas em gel, filtros ou solução, mas também em preparações histológicas ou cromossômicas. Este método é chamado de hibridização in situ. Uma variante do método, na qual preparações de DNA ou RNA marcadas com fluorocromos são usadas como sondas, é chamada de FISH (hibradização in situ com fluoresceína). A sonda de DNA marcada é aplicada a preparações de cromossomos em metáfase, diferencialmente corados e preparados para hibridização (desnaturados). O tratamento preliminar dos cromossomos é usado para facilitar o acesso da sonda ao DNA genômico. Após a lavagem das moléculas de DNA não ligadas e a aplicação de uma emulsão fotossensível (ao usar um marcador radioativo), ou a realização do tratamento apropriado (ao usar sondas de DNA marcadas com biotina ou fluoresceína), os sítios de localização de sequências de DNA complementares à sonda de DNA usada podem ser detectados diretamente por microscopia como pontos característicos acima das seções correspondentes de certos cromossomos.
Este método de pesquisa nos permite determinar não apenas a afiliação cromossômica, mas também a localização intracromossômica do gene em estudo.
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