Vitamina A no sangue

Valores de referência (norma) para a concentração de vitamina A (retinol) no soro sanguíneo: em crianças de 1 a 6 anos - 0,7 a 1,5 μmol/l, de 7 a 12 anos - 0,91 a 1,71 μmol/l, de 13 a 19 anos - 0,91 a 2,51 μmol/l; em adultos - 1,05 a 2,09 μmol/l.

A vitamina A é uma vitamina lipossolúvel e existe em duas formas: a própria vitamina A, ou retinol (encontrada apenas em produtos de origem animal), e a pró-vitamina A, conhecida como caroteno (obtida de produtos de origem animal e vegetal), que pode ser convertida em retinol nas paredes do trato digestivo. Aproximadamente 50-90% do retinol da dieta é absorvido no intestino delgado e transportado em um complexo ligado a quilomícrons para o fígado, onde é armazenado como palmitato de retinol. Quando necessário, é liberado na corrente sanguínea como retinol complexado com proteína de ligação à vitamina A. No soro sanguíneo, o complexo proteína de ligação à vitamina A + retinol liga-se à transtirretina. Do soro sanguíneo, o retinol é absorvido pelas células-alvo, como os fotorreceptores da retina e do epitélio.

Quando o corpo recebe vitamina A em quantidades que excedem as necessidades (180-430 mcg de retinol por dia, dependendo da idade, sexo e estado fisiológico), o excesso é depositado no fígado, formando um depósito dessa vitamina. Quando a ingestão de retinol com alimentos é reduzida, suas reservas hepáticas são liberadas na corrente sanguínea, mantendo a concentração de retinol no soro sanguíneo em um nível normal (acima de 0,7 μmol/l). Outras formas biologicamente ativas de vitamina A (retinol e ácido retinoico) estão presentes no sangue em concentrações muito baixas (abaixo de 0,35 μmol/l); os ésteres de retinol representam aproximadamente 5% do total de vitamina A (0,1-0,17 μmol/l).

A vitamina A desempenha um papel importante nos processos de oxirredução. O retinol promove a formação de glicogênio no fígado e nos músculos, ajuda a aumentar o teor de colesterol no sangue e participa da síntese de esteroides e hormônios sexuais. É necessário para o crescimento e a formação do sistema esquelético, a ressíntese da rodopsina e também promove o funcionamento normal das membranas mucosas e do epitélio tegumentar da pele, prevenindo sua metaplasia, hiperceratose e descamação excessiva. A vitamina A ajuda a fortalecer cabelos, dentes e gengivas. Nos últimos anos, o papel diversificado da vitamina A na prevenção do câncer e na regulação da imunidade tem sido demonstrado (é necessária para a conclusão da fagocitose, aumenta a síntese de Ig, estimula a formação de T-killers, estimula T-helpers tipo II, etc.). A vitamina A é um antioxidante ativo, atuando principalmente na presença de vitamina E; protege a vitamina C da oxidação. A deficiência de vitamina A é considerada um fator de risco para neoplasias malignas. Estudos experimentais demonstraram que o aumento do teor de vitamina A na dieta aumenta a expectativa de vida média em 17,5%. O zinco é um cofator essencial no metabolismo da vitamina A (necessário para a síntese da proteína de ligação à vitamina A).

A necessidade média diária de retinol para adultos (20-50 anos) é de 1,2 mg (4000 UI, 1 UI equivale a 0,3 mcg de retinol), para mulheres grávidas - 1,5 mg (5000 UI), para mulheres que amamentam - 1,8 mg (6000 UI), para pessoas com mais de 60 anos - 2,5 mg (10.000 UI). Pelo menos um terço da necessidade diária de retinol deve ser fornecido ao corpo na forma final; o restante pode ser coberto pelo consumo de carotenoides, a partir dos quais o retinol é formado no corpo. Deve-se levar em consideração que aproximadamente 30% do retinol em produtos alimentícios é destruído durante o tratamento térmico. A atividade do retinol é 2 vezes maior que a do caroteno; além disso, apenas 30-40% deste último é absorvido no intestino. Portanto, ao avaliar a dieta, acredita-se que 1 mg de retinol equivale aproximadamente a 6 mg de carotenoides.

Determinação de retinol (vitamina A) e carotenoides no soro sanguíneo de acordo com Bessey modificado por LA Anisimova

Princípio do método

A determinação de vitamina A e carotenoides é baseada na sua hidrólise em solução alcoólica alcalina seguida de extração com uma mistura de solventes orgânicos.

Reagentes

• Solução de hidróxido de potássio (KOH) 11 M.
• 96% álcool etílico.
• Solução de hidróxido de potássio (KOH) 1 M em álcool etílico 96%: 1 volume de solução de KOH 11 M é misturado com 10 volumes de álcool etílico 96%. O reagente é preparado no dia do estudo. Caso ocorra coloração durante a mistura, o álcool deve ser purificado por destilação antes do uso.
• Xileno, quimicamente puro
• Octano, quimicamente puro
• Mistura de xileno-octano: preparada pela mistura de volumes iguais de xileno e octano.

Os estudos são realizados utilizando um espectrofotômetro.

O processo de determinação da vitamina A

O sangue retirado do dedo (cerca de 1 ml) é colocado em um tubo de centrífuga e colocado em um recipiente de vidro com água morna (temperatura de 40-45 °C) por 20 a 30 minutos. Para separar o soro, o coágulo sanguíneo é cuidadosamente contornado pela borda das paredes do tubo com um bastão de vidro fino e centrifugado a 3.000 rpm por 10 minutos.

Coleta-se 0,12 ml de soro e transfere-se para um tubo de aglutinação, onde se adiciona 0,12 ml de solução alcoólica de hidróxido de potássio 1 M. O conteúdo é agitado vigorosamente.

Tubos de ensaio com amostras são colocados em banho-maria por 20 minutos a uma temperatura de 60° C para realizar a hidrólise.

As amostras são resfriadas e 0,12 ml da mistura de xileno-octano é adicionado a elas, sendo agitadas vigorosamente por 10 a 15 s. Em seguida, são resfriadas novamente e centrifugadas.

A camada superior contendo vitamina A e carotenoides é cuidadosamente removida usando uma pipeta de Pasteur com bulbo de borracha e transferida para microcuvetas.

As amostras são espectrofotométricas em um comprimento de onda de 328 nm para determinar a vitamina A e em um comprimento de onda de 460 nm para determinar os carotenoides.

Após a espectrofotometria, as amostras são expostas à radiação ultravioleta para destruir a vitamina A. Para isso, uma lâmpada de quartzo (bactericida) é instalada a uma distância de 15-20 cm das microcuvetas, de modo que a parte da cubeta preenchida com líquido seja exposta à radiação; o tempo de irradiação é de 45-60 min.

As amostras são reespectrofotômetros em um comprimento de onda de 328 nm. O teor de vitamina A é determinado pela diferença nos valores de extinção (densidade óptica), levando em consideração o coeficiente (fator) 637 calculado por Bessey para a vitamina A.

O cálculo é realizado de acordo com a fórmula:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Onde X é o conteúdo de vitamina A, μg/dl; 637 é o coeficiente calculado por Bessey para determinação da vitamina A; E328(1) é a densidade óptica da solução antes da irradiação; E328(2) é a densidade óptica da solução após a irradiação.

O coeficiente para converter a concentração de vitamina A de µg/dL para µmol/L é 0,035.

O conteúdo de carotenoides é calculado usando a fórmula:

X = 480-E480,

Onde X é o teor de carotenoides, μg/dl; 480 é o coeficiente calculado por Bessey para determinação de carotenoides; E480 é a densidade óptica da solução de teste.

Observação

Segundo Bessey, um volume maior ou menor de soro pode ser usado na realização de pesquisas, mas sua proporção em relação ao volume da solução alcoólica deve ser constante com qualquer alteração no volume (quantidade) da mistura xileno-octano.

O teor normal de vitamina A no soro sanguíneo é: em recém-nascidos e lactentes - 160-270 μg/l; em adultos - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). O teor de carotenoides no soro sanguíneo de adultos é de 800-2300 μg/l.