Cólera vibrião

Segundo a OMS, a cólera é uma doença infecciosa caracterizada por diarreia aguda, grave e desidratante, com fezes em forma de água de arroz, consequência da infecção por Vibrio cholerae. Caracterizada por sua pronunciada capacidade de disseminação em epidemias, curso grave e alta taxa de mortalidade, a cólera é considerada uma infecção particularmente perigosa.

A pátria histórica da cólera é a Índia, ou mais precisamente, o delta dos rios Ganges e Brahmaputra (hoje Índia Oriental e Bangladesh), onde ela existe desde tempos imemoriais (epidemias de cólera nessa região foram observadas já em 500 a.C.). A longa existência de um foco endêmico de cólera aqui é explicada por muitas razões. O vibrião da cólera não só consegue sobreviver na água por muito tempo, como também se reproduzir nela em condições favoráveis - temperaturas acima de 12 °C, presença de matéria orgânica. Todas essas condições são evidentes na Índia: clima tropical (temperatura média anual de 25 a 29 °C), chuvas abundantes e pântanos, alta densidade populacional, especialmente no delta do rio Ganges, grande quantidade de matéria orgânica na água, poluição contínua da água durante todo o ano com esgoto e excrementos, baixo padrão de vida material e ritos religiosos e de culto únicos da população.

Na história das epidemias de cólera, quatro períodos podem ser distinguidos.

Período I - até 1817, quando a cólera se concentrou apenas no Leste e Sul da Ásia, principalmente na Índia, e não se espalhou além de suas fronteiras.

Período II - de 1817 a 1926. Com o estabelecimento de amplos laços econômicos e de outros tipos entre a Índia e países europeus e outros, a cólera ultrapassou a Índia e, espalhando-se pelas rotas dos laços econômicos e religiosos, causou seis pandemias que ceifaram milhões de vidas. A Rússia foi o primeiro país europeu a ser atingido pela cólera. De 1823 a 1926, a Rússia viveu 57 anos de cólera. Durante esse período, mais de 5,6 milhões de pessoas adoeceram com cólera e 2,14 milhões de pessoas morreram em decorrência dela (40%).

Período III - de 1926 a 1961, a cólera retornou ao seu principal foco endêmico, dando início a um período de relativa prosperidade. Parecia que, com o desenvolvimento de sistemas modernos de purificação de água potável, remoção e desinfecção de águas residuais e o desenvolvimento de medidas especiais contra a cólera, incluindo a criação de um serviço de quarentena, os países do mundo estariam protegidos de forma confiável contra outra invasão de cólera.

O quarto período começou em 1961 e continua até hoje. A sétima pandemia começou não na Índia, mas na Indonésia, espalhou-se rapidamente para as Filipinas, China, países da Indochina e, em seguida, para outros países da Ásia, África e Europa. As peculiaridades desta pandemia incluem o fato de que, em primeiro lugar, foi causada por uma variante especial do vibrião da cólera - V. cholerae eltor, que até 1961 não era oficialmente reconhecido como o agente causador da cólera; em segundo lugar, em termos de duração, superou todas as pandemias anteriores; em terceiro lugar, ocorreu em duas ondas, a primeira das quais durou até 1990, e a segunda começou em 1991 e cobriu muitos países da América do Sul e do Norte, incluindo os Estados Unidos, que não tinham uma epidemia de cólera desde 1866. De 1961 a 1996, 3.943.239 pessoas adoeceram com cólera em 146 países.

O agente causador da cólera, Vibrio cholerae, foi descoberto em 1883 durante a quinta pandemia por R. Koch, mas o vibrião foi descoberto pela primeira vez nas fezes de pacientes com diarreia em 1854 por F. Pacini.

V. cholerae pertence à família Vibrionaceae, que inclui vários gêneros (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium). O gênero Vibrio possui mais de 25 espécies desde 1985, das quais as mais importantes para os humanos são V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus e V. fluvialis.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]

Principais características do gênero Vibrio

Bastonetes gram-negativos curtos, não formadores de esporos e cápsulas, curvos ou retos, com 0,5 µm de diâmetro e 1,5-3,0 µm de comprimento, móveis (V. cholerae é monotrico, algumas espécies têm dois ou mais flagelos polares); crescem bem e rapidamente em meios regulares, são quimioorganotróficos e fermentam carboidratos para produzir ácido sem gás (a glicose é fermentada pela via de Embden-Meyerhof). Oxidase-positivos, formam indol, reduzem nitratos a nitritos (V. cholerae apresenta reação nitrosoindol positiva), decompõem gelatina, frequentemente apresentam reação de Voges-Proskauer positiva (ou seja, formam acetilmetilcarbinol), não apresentam urease, não formam H2S, apresentam lisina e ornitina descarboxilases, mas não apresentam arginina diidrolase. Uma característica do gênero Vibrio é a sensibilidade da maioria das cepas bacterianas ao fármaco 0/129 (2,4-diamino-6,7-diazopropilpteridina), enquanto representantes das famílias Pseudomonadaceae e Enterobacteriaceae são resistentes a esse fármaco. Vibrios são aeróbios e anaeróbios facultativos, a temperatura ótima para crescimento é de 18-37 °C, pH 8,6-9,0 (crescem na faixa de pH de 6,0-9,6), algumas espécies (halófilas) não crescem na ausência de NaCl. O conteúdo de G + C no DNA é de 40-50 mol % (para V. cholerae cerca de 47 mol %). Testes bioquímicos são usados para diferenciar dentro da família Vibrionaceae dos gêneros morfologicamente semelhantes Aeromonas e Plesiomonas, bem como para distinguir da família Enterobacteriaceae.

O vibrião da cólera difere da família Pseudomonadaceae por fermentar glicose apenas pela via de Embden-Meyerhof (sem a participação de O2), enquanto o primeiro consome glicose apenas na presença de O2. Essa diferença entre eles é facilmente revelada no meio Hugh-Leifson. O meio contém ágar nutriente, glicose e um indicador. A semeadura é feita em duas colunas com o meio Hugh-Leifson, uma das quais é preenchida com vaselina (para criar condições anaeróbicas). No caso do crescimento do vibrião da cólera, a cor do meio muda em ambos os tubos de ensaio, no caso do crescimento das pseudomonadáceas - apenas no tubo de ensaio sem vaselina (condições de crescimento aeróbico).

O vibrião da cólera é muito pouco exigente em meios nutrientes. Ele se reproduz bem e rapidamente em água peptonada (PV) alcalina a 1% (pH 8,6-9,0) contendo 0,5-1,0% de NaCl, superando o crescimento de outras bactérias. Para suprimir o crescimento de Proteus, recomenda-se adicionar telurito de potássio (em uma diluição final de 1:100.000) a 1% de PV. 1% de PV é o melhor meio de enriquecimento para o vibrião da cólera. Durante o crescimento, forma uma película delicada, solta e acinzentada na superfície do PV após 6-8 horas, que é facilmente destruída quando agitada e cai no fundo na forma de flocos, o PV torna-se moderadamente turvo. Vários meios seletivos têm sido propostos para o isolamento do vibrião da cólera: ágar alcalino, ágar de sal biliar, albuminato alcalino, ágar alcalino com sangue, lactose-sacarose e outros meios. O melhor é o meio TCBS (ágar tiossulfato citrato-bromotimol sacarose) e suas modificações. No entanto, o MPA alcalino é o mais utilizado, no qual o vibrião da cólera forma colônias lisas, transparentes, azuladas, em forma de disco, de consistência viscosa.

Quando semeado por injeção em uma coluna de gelatina, o vibrião, após 2 dias a uma temperatura de 22-23 C, causa liquefação da superfície na forma de uma bolha, depois em forma de funil e, finalmente, camada por camada.

No leite, o vibrião se multiplica rapidamente, causando coagulação após 24-48 horas, e então ocorre a peptonização do leite, e após 3-4 dias o vibrião morre devido a uma mudança no pH do leite para o lado ácido.

B. Heiberg, com base na capacidade de fermentar manose, sacarose e arabinose, dividiu todos os vibriões (cólera e semelhantes à cólera) em vários grupos, cujo número agora chega a 8.

Vibrio cholerae pertence ao primeiro grupo de Heiberg.

Vibrios semelhantes em características morfológicas, culturais e bioquímicas ao vibrio da cólera foram e são chamados de forma diferente: paracholera, cholera-like, NAG-vibrios (vibrios não aglutinantes); vibrios não pertencentes ao grupo O1. O último nome enfatiza com mais precisão sua relação com o vibrio da cólera. Conforme estabelecido por A. Gardner e K. Venkat-Raman, os vibrios da cólera e semelhantes à cólera têm um antígeno H comum, mas diferem nos antígenos O. De acordo com o antígeno O, os vibrios da cólera e semelhantes à cólera são atualmente divididos em 139 sorogrupos O, mas seu número está em constante expansão. O vibrio da cólera pertence ao grupo O1. Possui um antígeno A comum e dois antígenos tipo-específicos - B e C, que permitem distinguir três sorotipos de V. cholerae: o sorotipo Ogawa (AB), o sorotipo Inaba (AC) e o sorotipo Hikoshima (ABC). O vibrião da cólera na fase de dissociação possui um antígeno OR. Nesse sentido, soros O, OR e soros tipo-específicos Inaba e Ogawa são utilizados para identificar V. cholerae.

Em 1992-1993, uma grande epidemia de cólera eclodiu em Bangladesh, Índia, China, Malásia e outros países, cujo agente causador era um novo sorotipo, até então desconhecido, da espécie Vibrio cholerae. Difere do V. cholerae O1 pelas características antigênicas: possui o antígeno 0139 e uma cápsula polissacarídica, e não é aglutinado por nenhum outro soro O. Todas as suas outras propriedades morfológicas e biológicas, incluindo a capacidade de causar cólera, ou seja, de sintetizar a exotoxina-colerogênio, mostraram-se semelhantes às propriedades do V. cholerae O1. Consequentemente, um novo agente causador da cólera, o V. cholerae 0139, aparentemente surgiu como resultado de uma mutação que alterou o antígeno O. Foi denominado V. cholerae 0139 bengal.

A questão da relação dos chamados vibriões semelhantes à cólera com o V. cholerae permanece obscura há muito tempo. No entanto, uma comparação entre o V. cholerae e os vibriões semelhantes à cólera (NAG-vibrios) em mais de 70 características revelou uma similaridade de 90%, e o grau de homologia de DNA entre o V. cholerae e os vibriões NAG estudados é de 70-100%. Portanto, os vibriões semelhantes à cólera são combinados em uma única espécie com o vibrião da cólera, do qual diferem principalmente em seus antígenos O, sendo, portanto, chamados de vibriões do grupo não-01 - V. cholerae não-01.

A espécie V. cholerae é dividida em 4 biótipos: V. cholerae, V. eltor, V. proteus e V. albensis. A natureza do vibrião El Tor tem sido debatida por muitos anos. Este vibrião foi isolado em 1906 por F. Gottschlich na estação de quarentena de El Tor do corpo de um peregrino que morreu de disenteria. F. Gottschlich isolou várias dessas cepas. Elas não eram diferentes do vibrião da cólera em todas as suas propriedades e foram aglutinadas pelo soro O da cólera. No entanto, como não havia cólera entre os peregrinos naquela época, e o transporte a longo prazo do vibrião da cólera era considerado improvável, a questão do possível papel etiológico do V. eltor na cólera permaneceu controversa por um longo tempo. Além disso, o vibrião El Tor, ao contrário do V. cholerae, tinha um efeito hemolítico. No entanto, em 1937, este vibrião causou uma grande e grave epidemia de cólera na ilha de Sulawesi (Indonésia), com uma taxa de mortalidade superior a 60%. Finalmente, em 1961, tornou-se o culpado da 7ª pandemia e, em 1962, a questão da sua natureza colérica foi finalmente resolvida. As diferenças entre V. cholerae e V. eltor dizem respeito apenas a algumas características. Em todas as outras propriedades, V. eltor não é fundamentalmente diferente de V. cholerae. Além disso, foi agora estabelecido que o biótipo V. proteus (V. finklerpriori) inclui todo o grupo de vibriões, exceto o grupo 01 (e agora 0139), anteriormente chamado de vibriões NAG. O biótipo V. albensis foi isolado do rio Elba e tem a capacidade de fosforescência, mas tendo-a perdido, não é diferente de V. proteus. Com base nesses dados, a espécie Vibrio cholerae está atualmente dividida em 4 biótipos: V. cholerae 01 cholerae, V. cholerae eltor, V. cholerae 0139 bengal e V. cholerae non 01. Os três primeiros pertencem a dois sorovares 01 e 0139. O último biovar inclui os biótipos anteriores V. proteus e V. albensis e é representado por muitos outros sorovares de vibrios que não são aglutinados pelos soros 01 e 0139, ou seja, vibrios NAG.

Fatores de patogenicidade do vibrião da cólera

[ 7 ], [ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ]

Quimiotaxia de Vibrio cholerae

Com a ajuda dessas propriedades, o vibrião interage com as células epiteliais. Em mutantes do vibrião da cólera (que perderam a capacidade de quimiotaxia), a virulência é significativamente reduzida; em mutantes do Mob (que perderam a mobilidade), ela desaparece completamente ou diminui drasticamente.

Fatores de adesão e colonização pelos quais o vibrião adere às microvilosidades e coloniza a mucosa do intestino delgado. Os fatores de adesão incluem mucinase, hemaglutinina/protease solúvel, neuraminidase, etc. Eles promovem a adesão e a colonização destruindo substâncias que fazem parte do muco. A hemaglutinina/protease solúvel promove a separação dos vibriões dos receptores das células epiteliais e sua saída do intestino para o ambiente externo, garantindo sua disseminação epidêmica. A neuraminidase fortalece a ligação entre o colerógeno e as células epiteliais e facilita a penetração da toxina nas células, o que aumenta a gravidade da diarreia.

A toxina da cólera é um colerógeno.

As chamadas novas toxinas que são capazes de causar diarreia, mas não têm relação genética ou imunológica com o colerógeno.

Fatores dermoneuróticos e hemorrágicos. A natureza desses fatores tóxicos e seu papel na patogênese da cólera não foram suficientemente estudados.

[ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ]

Endotoxinas de Vibrio cholerae

Os lipopolissacarídeos de V. cholerae têm uma forte propriedade endotóxica e causam intoxicação geral do corpo.

O principal fator de patogenicidade do vibrião da cólera listado é a exotoxina colerágena (CTX AB), que determina a patogênese desta doença. A molécula da cólera consiste em dois fragmentos - A e B. O fragmento A consiste em dois peptídeos - A1 e A2, que possui uma propriedade específica da toxina da cólera e lhe confere as qualidades de um superantígeno. O fragmento B consiste em 5 subunidades idênticas. Ele desempenha duas funções: 1) reconhece o receptor (monosialogangliosídeo) do enterócito e se liga a ele; 2) forma um canal hidrofóbico intramembrana para a passagem da subunidade A. O peptídeo A2 serve para ligar os fragmentos A e B. A função tóxica real é realizada pelo peptídeo Aj (ADP-ribosiltransferase). Ele interage com NAD, causando sua hidrólise; a ADP-ribose resultante se liga à subunidade reguladora da adenilato ciclase. Isso leva à inibição da hidrólise do GTP. O complexo GTP + adenilato ciclase resultante causa a hidrólise de ATP com a formação de AMPc. (Outra via para o acúmulo de AMPc é a supressão, pelo colerógeno, da enzima que hidrolisa o AMPc em 5-AMP). A manifestação da função do gene ctxAB, que codifica a síntese de exotoxina, depende da função de vários outros genes de patogenicidade, em particular os genes tcp (que codificam a síntese de pili de adesão controlados por toxina - TCAP), os genes reguladores toxR, toxS e toxT, os genes hap (hemaglutinina/protease solúvel) e neuraminidase (neuraminidase). Portanto, o controle genético da patogenicidade do V. cholerae é complexo.

Como se constatou, existem duas ilhas de patogenicidade no cromossomo V. cholerae. Uma delas é o genoma do fago filamentoso de conversão moderada CTXφ, e a outra é o genoma do fago também filamentoso de conversão moderada VPIcp. Cada uma dessas ilhas de patogenicidade contém cassetes de genes especificados na prófase, que determinam a patogenicidade do patógeno da cólera. O prófago CTXφ carrega os genes CTX, genes de novas toxinas zot e ace, o gene ser (síntese de adesina) e o gene ortU (síntese de um produto com função desconhecida). Este cassete também inclui o gene nei e a região RS2 do fago, que codifica a replicação e a integração do prófago nos cromossomos. Os genes zot, ace e ortU são necessários para a formação de vírions do fago quando o prófago é excluído do cromossomo do patógeno.

O prófago VPIcp carrega os genes tcp (que codificam a produção de pili (proteína TCPA)), toxT, toxR e act (fator de colonização adicional, genes de mobilidade (integrases e transposases)). A transcrição de genes de virulência é regulada por três genes reguladores: toxR, toxS e toxT. Esses genes, coordenadamente, no nível da transcrição, alteram a atividade de mais de 20 genes de virulência, incluindo ctxAB, tcp e outros genes. O principal gene regulador é o toxR. Seu dano ou ausência leva à avirulência ou a uma diminuição de mais de 100 vezes na produção da toxina colérica CTX e TCPA. Possivelmente, é assim que a expressão coordenada de genes de virulência é regulada em ilhas de patogenicidade formadas por fagos conversores temperados e em outras espécies bacterianas. Foi estabelecido que outro profago K139 está presente no cromossomo de V. cholerae eltor, mas seu genoma foi pouco estudado.

O gene hap está localizado no cromossomo. Assim, a virulência (patogenicidade) e a capacidade epidêmica do V. cholerae são determinadas por quatro genes: ctxAB, tcp, toxR e hap.

Vários métodos podem ser usados para detectar a capacidade do V. cholerae de produzir colerógeno.

Teste biológico em coelhos. Quando vibriões da cólera são injetados por via intramuscular em coelhos lactentes (com no máximo 2 semanas de idade), eles desenvolvem uma síndrome típica da cólera: diarreia, desidratação e morte do coelho.

Detecção direta de colerógeno por PCR, IFM ou reação de hemólise imune passiva (o colerógeno liga-se ao gene Gmj dos eritrócitos, que é lisado pela adição de anticorpos antitóxicos e complemento). No entanto, a detecção da capacidade de produzir toxina por si só não é suficiente para determinar o perigo epidêmico dessas cepas. Para isso, é necessário detectar a presença do gene hap. Portanto, a melhor e mais confiável maneira de diferenciar cepas toxigênicas e epidêmicas de vibriões coléricos dos sorogrupos 01 e 0139 é por PCR, utilizando primers específicos para detectar todos os quatro genes de patogenicidade: ctxAB, tcp, toxR e hap.

A capacidade do V. cholerae, além dos sorogrupos 01 ou 0139, de causar doenças diarreicas esporádicas ou em salvas em humanos pode ser devida à presença de enterotoxinas do tipo LT ou ST, que estimulam os sistemas adenilato ou guanilato ciclase, respectivamente, ou à presença apenas dos genes ctxAB, mas nenhum gene hap.

Durante a sétima pandemia, foram isoladas cepas de V. cholerae com diferentes graus de virulência: colerogênicas (virulentas), fracamente colerogênicas (baixa virulência) e não colerogênicas (não virulentas). As cepas de V. cholerae não colerogênicas, em geral, apresentam atividade hemolítica, não são lisadas pelo fago HDF (fago de diagnóstico da cólera)(5) e não causam doenças humanas.

Para a fagotipagem de V. cholerae 01 (incluindo El Tor), S. Mukherjee propôs conjuntos de fagos, que foram então suplementados com outros fagos na Rússia. Um conjunto desses fagos (1-7) permite distinguir os tipos de fagos entre V. cholerae 0116. Para a identificação de V. cholerae El Tor toxigênico e não toxigênico, em vez de HDF-3, HDF-4 e HDF-5, os fagos CTX* (lisam vibriões toxigênicos de El Tor) e CTX" (lisam vibriões não toxigênicos de El Tor) são agora propostos na Rússia.

[ 19 ], [ 20 ], [ 21 ]

Resistência dos patógenos da cólera

Os vibriões da cólera sobrevivem bem em baixas temperaturas; permanecem viáveis no gelo por até 1 mês; na água do mar - até 47 dias, na água do rio - de 3 a 5 dias a várias semanas, em água mineral fervida sobrevivem por mais de 1 ano, no solo - de 8 dias a 3 meses, em fezes frescas - até 3 dias, em produtos cozidos (arroz, macarrão, carne, mingau, etc.) sobrevivem por 2 a 5 dias, em vegetais crus - 2 a 4 dias, em frutas - 1 a 2 dias, em leite e laticínios - 5 dias; quando armazenados no frio, o período de sobrevivência aumenta em 1 a 3 dias; em linho contaminado com fezes, sobrevivem por até 2 dias e em material úmido - uma semana. Os vibriões da cólera morrem em 5 minutos a uma temperatura de 80 °C e instantaneamente a 100 °C; são altamente sensíveis a ácidos; morrem em 5 a 15 minutos sob a influência de cloramina e outros desinfetantes. São sensíveis à secagem e à luz solar direta, mas sobrevivem bem e por muito tempo, multiplicando-se até mesmo em corpos d'água abertos e águas residuais ricas em matéria orgânica, com pH alcalino e temperatura acima de 10-12 °C. São altamente sensíveis ao cloro: uma dose de cloro ativo de 0,3-0,4 mg/l de água em 30 minutos causa desinfecção confiável contra vibriões da cólera.

Vibrios patogênicos para humanos que não pertencem à espécie Vibrio Cholerae

O gênero Vibrio inclui mais de 25 espécies, das quais, além de V. cholerae, pelo menos oito são capazes de causar doenças em humanos: V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. fluvialis, V. fumissii, V. mimicus, V. damsela e V. hollisae. Todos esses vibrios habitam mares e baías. A infecção ocorre através da natação ou da ingestão de frutos do mar. Foi descoberto que os vibrios da cólera e os não-cólera podem causar não apenas gastroenterite, mas também infecções de feridas. Essa capacidade foi encontrada nos grupos V. cholerae 01 e não-01, V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. mimicus, V. damsela e V. vulnificus. Eles causam processos inflamatórios em tecidos moles quando são danificados pela concha de animais marinhos ou quando em contato direto com água do mar infectada.

Dos vibriões patogênicos não coléricos listados, os de maior interesse prático são V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus e V. fluvialis.

V. parahaemolyticus - um vibrião parahemolítico - foi isolado pela primeira vez no Japão em 1950 durante um grande surto de intoxicação alimentar causada pelo consumo de sardinhas semi-secas (a mortalidade foi de 7,5%). O agente causador pertencia ao gênero Vibrio por R. Sakazaki em 1963. Ele dividiu as cepas estudadas em 2 espécies: V. parahaemolyticus e V. alginolyticus. Ambas as espécies são encontradas em águas marinhas costeiras e em seus habitantes, são halófilos (do grego hals - sal); ao contrário dos vibriões comuns, os halofílicos não crescem em meios sem NaCl e se reproduzem bem em altas concentrações dele. A afiliação de espécies dos vibriões halofílicos é determinada por sua capacidade de fermentar sacarose, formar acetilmetilcarbinol e se reproduzir em PV com 10% de NaCl. Todas essas características são inerentes à espécie V. alginolyticus, mas estão ausentes em V. parahaemolyticus.

O vibrio parahemolítico possui três tipos de antígenos: antígenos H flagelares termolábeis, antígenos O termoestáveis que não são destruídos pelo aquecimento a 120 °C por 2 horas e antígenos K de superfície que são destruídos pelo aquecimento. Culturas recém-isoladas de V. parahaemolyticus possuem antígenos K bem definidos que protegem os vibrios vivos da aglutinação por soros O homólogos. Os antígenos H são os mesmos para todas as cepas, mas os antígenos H de monotrichus diferem dos antígenos H de peritrichs. De acordo com o antígeno O, V. parahaemolyticus é dividido em 14 sorogrupos. Dentro dos sorogrupos, os vibrios são divididos em sorotipos de acordo com os antígenos K, cujo número total é 61. O esquema antigênico de V. parahaemolyticus foi desenvolvido apenas para suas cepas isoladas de humanos.

A patogenicidade do V. parahaemolyticus está associada à sua capacidade de sintetizar hemolisina, que possui propriedades enterotóxicas. Esta última é detectada pelo método de Kanagawa. Sua essência reside no fato de que o V. parahaemolyticus, patogênico para humanos, causa hemólise clara em ágar sangue contendo 7% de NaCl. Em ágar sangue contendo menos de 5% de NaCl, a hemólise é causada por muitas cepas de V. parahaemolyticus, e em ágar sangue com 7% de NaCl - apenas cepas com propriedades enteropatogênicas. O vibrião parahemolítico é encontrado nas costas dos mares Japonês, Cáspio, Negro e outros. Causa infecções tóxicas de origem alimentar e doenças semelhantes à disenteria. A infecção ocorre ao comer frutos do mar crus ou semi-crus infectados com V-parahaemolyticus (peixes marinhos, ostras, crustáceos, etc.).

Entre os oito vibriões não coléricos mencionados acima, o mais patogênico para humanos é o V. vulnificus, descrito pela primeira vez em 1976 como Beneckea vulnificus e posteriormente reclassificado como Vibrio vulnificus em 1980. É frequentemente encontrado na água do mar e em seus habitantes, causando diversas doenças humanas. As cepas de V. vulnificus de origem marinha e clínica não diferem entre si, seja fenotipicamente ou geneticamente.

As infecções de feridas causadas por V. vulnificus progridem rapidamente e levam à formação de tumores com subsequente necrose do tecido, acompanhada de febre, calafrios, às vezes dor intensa e, em alguns casos, exigindo amputação.

Foi descoberto que V. vulnificus produz exotoxina. Experimentos em animais demonstraram que o patógeno causa danos locais graves, com desenvolvimento de edema e necrose tecidual, seguidos de morte. O papel da exotoxina na patogênese da doença está sendo estudado.

Além de infecções de feridas, o V. vulnificus pode causar pneumonia em vítimas de afogamento e endometrite em mulheres após exposição à água do mar. A forma mais grave de infecção causada pelo V. vulnificus é a septicemia primária associada à ingestão de ostras cruas (e possivelmente de outros animais marinhos). Essa doença se desenvolve muito rapidamente: o paciente desenvolve mal-estar, febre, calafrios e prostração, seguidos de hipotensão grave, que é a principal causa de morte (a taxa de mortalidade é de cerca de 50%).

V. fluvialis foi descrito pela primeira vez como patógeno de gastroenterite em 1981. Pertence a um subgrupo de vibriões não patogênicos à cólera que possuem arginina diidrolase, mas não possuem netornitina e lisina descarboxilases (V. fluvialis, V. furnissii, V. damsela, ou seja, fenotipicamente semelhantes a Aeromonas). V. fluvialis é um agente causador comum de gastroenterite, que é acompanhada por vômitos intensos, diarreia, dor abdominal, febre e desidratação grave ou moderada. O principal fator patogênico é a enterotoxina.

Epidemiologia da cólera

A principal fonte de infecção é apenas uma pessoa - um paciente com cólera ou um portador de vibrião, bem como água contaminada com eles. Nenhum animal na natureza contrai cólera. A via de infecção é fecal-oral. Vias de infecção: a) a principal - através da água usada para beber, tomar banho e necessidades domésticas; b) contato domiciliar e c) através dos alimentos. Todas as principais epidemias e pandemias de cólera foram associadas à água. Os vibriões da cólera possuem mecanismos adaptativos que garantem a existência de suas populações tanto no corpo humano quanto em certos ecossistemas de corpos d'água abertos. A diarreia grave, causada pelo vibrião da cólera, leva à limpeza dos intestinos de bactérias concorrentes e contribui para a ampla disseminação do patógeno no meio ambiente, principalmente em águas residuais e em corpos d'água abertos onde são despejados. Uma pessoa com cólera excreta o patógeno em grandes quantidades – de 100 milhões a 1 bilhão por 1 ml de fezes; um portador de vibrião excreta de 100 a 100.000 vibriões em 1 ml; a dose infecciosa é de cerca de 1 milhão de vibriões. A duração da excreção do vibrião da cólera em portadores saudáveis é de 7 a 42 dias e de 7 a 10 dias em pessoas recuperadas. Excreções mais longas são extremamente raras.

Uma peculiaridade da cólera é que, após ela, via de regra, não há transmissão a longo prazo e não se formam focos endêmicos estáveis. No entanto, como já indicado, devido à poluição de corpos d'água abertos com águas residuais contendo grandes quantidades de substâncias orgânicas, detergentes e sal de cozinha, no verão o vibrião da cólera não só sobrevive neles por muito tempo, como até se multiplica.

De grande importância epidemiológica é o fato de que os vibriões da cólera do grupo 01, tanto não toxigênicos quanto toxigênicos, podem persistir por muito tempo em vários ecossistemas aquáticos como formas não cultivadas. Utilizando a reação em cadeia da polimerase, genes vct de formas não cultivadas de V. chokrae foram detectados em vários corpos d'água em diversos territórios endêmicos da CEI durante estudos bacteriológicos negativos.

O foco endêmico do vibrião da cólera El Tor é a Indonésia. Acredita-se que o surgimento desse culpado da sétima pandemia de lá esteja associado à expansão dos laços econômicos da Indonésia com o mundo exterior após sua independência, e a duração e o desenvolvimento rápido da pandemia, especialmente sua segunda onda, foram influenciados decisivamente pela falta de imunidade à cólera e várias convulsões sociais nos países da Ásia, África e América.

Em caso de cólera, são tomadas uma série de medidas antiepidêmicas, entre as quais as principais e decisivas são a detecção ativa e oportuna e o isolamento (hospitalização, tratamento) de pacientes em formas agudas e atípicas e portadores saudáveis de vibriões; são tomadas medidas para prevenir possíveis vias de infecção; é dada atenção especial ao abastecimento de água (cloração da água potável), ao cumprimento das condições sanitárias e higiênicas em empresas alimentícias, instituições infantis, locais públicos; é realizado um controle rigoroso, inclusive bacteriológico, em corpos d'água abertos, é realizada a imunização da população, etc.

[ 22 ], [ 23 ], [ 24 ], [ 25 ], [ 26 ]

Sintomas de cólera

O período de incubação da cólera varia de algumas horas a 6 dias, na maioria das vezes de 2 a 3 dias. Ao penetrarem no lúmen do intestino delgado, os vibriões da cólera, devido à sua mobilidade e quimiotaxia para a membrana mucosa, dirigem-se ao muco. Para penetrar, os vibriões produzem uma série de enzimas: neuraminidase, mucinase, proteases e lecitinase, que destroem as substâncias contidas no muco e facilitam o movimento dos vibriões para as células epiteliais. Por adesão, os vibriões aderem ao glicocálice do epitélio e, perdendo a mobilidade, começam a multiplicar-se intensamente, colonizando as microvilosidades do intestino delgado (ver encarte colorido, Fig. 101.2) e, simultaneamente, produzem uma grande quantidade de exotoxina-colerogênio. As moléculas de colerogênio ligam-se ao monosialogangliosídeo Gni! E penetram na membrana celular, onde ativam o sistema adenilato ciclase, e o acúmulo de AMPc causa hipersecreção de fluido, cátions e ânions Na, HCO, Kl, Cl dos enterócitos, o que leva à diarreia da cólera, desidratação e dessalinização do corpo. Existem três tipos da doença:

• uma doença diarreica desidratante violenta e grave que resulta na morte do paciente em poucas horas;
• curso menos grave, ou diarreia sem desidratação;
• curso assintomático da doença (portador de vibriões).

Em casos graves de cólera, os pacientes desenvolvem diarreia, a frequência das fezes aumenta, as fezes tornam-se mais abundantes, tornam-se aquosas, perdem o odor fecal e parecem caldo de arroz (um líquido turvo com resíduos de muco e células epiteliais flutuando nele). Em seguida, ocorrem vômitos debilitantes, primeiro do conteúdo intestinal, e depois o vômito assume a aparência de caldo de arroz. A temperatura do paciente cai abaixo do normal, a pele fica azulada, enrugada e fria - cólera álgida. Como resultado da desidratação, o sangue engrossa, desenvolve-se cianose, falta de oxigênio, a função renal sofre acentuadamente, surgem convulsões, o paciente perde a consciência e ocorre a morte. A taxa de mortalidade por cólera durante a sétima pandemia variou de 1,5% nos países desenvolvidos a 50% nos países em desenvolvimento.

A imunidade pós-infecciosa é forte, duradoura e doenças recorrentes são raras. A imunidade é antitóxica e antimicrobiana, causada por anticorpos (as antitoxinas persistem por mais tempo do que os anticorpos antimicrobianos), células de memória imunológica e fagócitos.

Diagnóstico laboratorial da cólera

O método principal e decisivo para o diagnóstico da cólera é o bacteriológico. O material para exame do paciente são fezes e vômito; as fezes são examinadas para verificar a presença de vibriões; uma secção ligada do intestino delgado e da vesícula biliar é colhida para exame de pessoas que morreram de cólera; de objetos do ambiente externo, água de reservatórios abertos e águas residuais são os mais frequentemente examinados.

Ao realizar um estudo bacteriológico, as três condições a seguir devem ser atendidas:

• semear o material do paciente o mais rápido possível (o vibrião da cólera sobrevive nas fezes por um curto período de tempo);
• o recipiente em que o material é levado não deve ser desinfetado com produtos químicos e não deve conter vestígios deles, pois o vibrião da cólera é muito sensível a eles;
• eliminar a possibilidade de contaminação e infecção de outras pessoas.

A cultura é isolada de acordo com o seguinte esquema: semeadura em PV, simultaneamente em MPA alcalino ou qualquer meio seletivo (TCBS é o melhor). Após 6 horas, o filme formado em PV é examinado e, se necessário, é feita uma transferência para um segundo PV (a taxa de semeadura do vibrião da cólera neste caso aumenta em 10%). De PV, uma transferência é feita para MPA alcalino. Colônias suspeitas (transparentes vítreas) são transferidas para obter uma cultura pura, que é identificada por propriedades morfológicas, culturais, bioquímicas, motilidade e finalmente tipificada usando soros aglutinantes diagnósticos O-, OR-, Inaba e Ogawa e fagos (HDF). Várias opções para diagnóstico acelerado foram propostas, a melhor das quais é o método sorológico luminescente. Ele permite detectar o vibrião da cólera diretamente no material de teste (ou após cultivo preliminar em dois tubos de ensaio com 1% de PV, a um dos quais o fago da cólera é adicionado) dentro de 1,5-2 horas. Para a detecção acelerada do vibrião da cólera, o Instituto de Medicina de Nizhny Novgorod propôs um conjunto de discos indicadores de papel, composto por 13 testes bioquímicos (oxidase, indol, urease, lactose, glicose, sacarose, manose, arabinose, manitol, inositol, arginina, ornitina, lisina), que permitem diferenciar representantes do gênero Vibrio dos gêneros Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas, Comamonas e da família Enterobacteriaceae. Para a detecção rápida do vibrião da cólera em fezes e em objetos ambientais, pode-se utilizar RPGA com um anticorpo diagnosticum. Para a detecção de formas não cultivadas do vibrião da cólera em objetos ambientais, utiliza-se apenas o método da reação em cadeia da polimerase.

Nos casos em que V. cholerae não pertencente ao grupo Ol são isolados, eles devem ser tipificados utilizando os soros aglutinantes correspondentes de outros sorogrupos. O isolamento de V. cholerae não pertencente ao grupo Ol de um paciente com diarreia (incluindo diarreia semelhante à colérica) requer as mesmas medidas antiepidêmicas utilizadas no caso do isolamento de V. cholerae não pertencente ao grupo Ol. Se necessário, a presença dos genes de patogenicidade ctxAB, tcp, toxR e hap é determinada nesses vibriões por PCR.

O diagnóstico sorológico da cólera é de natureza auxiliar. Para esse fim, pode-se utilizar a reação de aglutinação, mas é preferível determinar o título de anticorpos vibriocidas ou antitoxinas (os anticorpos contra a cólera são determinados por métodos de imunoensaio enzimático ou imunofluorescência).

Diagnóstico laboratorial de vibriões não patogênicos da cólera

O principal método de diagnóstico de doenças causadas por vibriões não patogênicos da cólera é o bacteriológico, utilizando meios seletivos como TCBS, MacConkey, etc. A pertença da cultura isolada ao gênero Vibrio é determinada com base nas principais características das bactérias desse gênero.

Tratamento da cólera

O tratamento de pacientes com cólera deve consistir principalmente na reidratação e na restauração do metabolismo normal de água e sal. Para tanto, recomenda-se o uso de soluções salinas, por exemplo, com a seguinte composição: NaCl - 3,5; NaHC03 - 2,5; KCl - 1,5 e glicose - 20,0 g por 1 litro de água. Esse tratamento com base patogênica, em combinação com antibioticoterapia racional, permite reduzir a taxa de mortalidade na cólera para 1% ou menos.

Prevenção específica da cólera

Para criar imunidade artificial, foi proposta uma vacina contra a cólera, incluindo uma feita a partir de cepas mortas de Inaba e Ogawa; um toxoide colérico para uso subcutâneo e uma vacina química bivalente enteral composta por anatoxina e antígenos somáticos dos sorotipos Inaba e Ogawa, uma vez que não se forma imunidade cruzada. No entanto, a duração da imunidade pós-vacinação não é superior a 6 a 8 meses, de modo que as vacinações são realizadas apenas de acordo com indicações epidemiológicas. A profilaxia antibiótica tem se mostrado eficaz em focos de cólera, em particular a tetraciclina, à qual o vibrião colérico é altamente sensível. Outros antibióticos eficazes contra V. cholerae podem ser usados para o mesmo propósito.