O agente causador da tularemia

A tularemia é uma doença primária de animais (roedores); em humanos, ocorre como uma doença infecciosa aguda com quadro clínico variado e recuperação lenta. O agente causador da tularemia – Francisella tularensis – foi descoberto por G. McCoy e S. Chapin em 1912 durante uma epizootia entre esquilos terrestres na região do Lago Tulare (Califórnia), tendo sido estudado detalhadamente por E. Francis, em cuja homenagem o gênero recebeu o nome.

São bastonetes polimórficos, cocóides ou elipsóides, muito pequenos, com tamanho de 0,2 a 0,7 µm, que frequentemente produzem coloração bipolar quando métodos especiais de coloração são utilizados; são imóveis, gram-negativos, não formam esporos; catalase-negativos, formam H2S, aeróbios estritos, a temperatura ótima para crescimento é 37 °C, pH 6,7 a 7,2. Cepas virulentas possuem cápsula, formam ácido sem gás durante a fermentação de alguns carboidratos (glicose, maltose, manose, frutose, dextrina), o grau de fermentação varia entre as cepas, o conteúdo de G + C no DNA é de 33 a 36 mol%. F. tularensis não cresce em meios comuns. G. McCoy e Sh. Chapin usaram um meio de gema coagulada. Nele, o bacilo da tularemia cresce na forma de pequenas colônias delicadas que lembram gotas de orvalho, e então a cultura adquire o caráter de uma delicada camada de shagreen com uma consistência mucosa fracamente expressa. E. Francis propôs o ágar nutriente para o cultivo do bacilo da tularemia, contendo 0,05-0,1% de cistina, 1% de glicose e 5-10% de sangue. Nesse meio, o crescimento é mais abundante e rugoso: as colônias são redondas, com superfície lisa, de cor leitosa, úmidas, com consistência mucosa, circundadas por um halo verde característico. O crescimento é lento, as colônias atingem seu tamanho máximo no 3º ao 5º dia (1-4 mm). A bactéria da tularemia se reproduz bem no saco vitelínico de um embrião de galinha, causando sua morte no 3º ao 4º dia.

Os seguintes aminoácidos são necessários para o crescimento de F. tularensis: arginina, leucina, isoleucina, lisina, metionina, prolina, treonina, histidina, valina, cistina e, para algumas subespécies, serina, tirosina e ácido aspártico. Além disso, para o crescimento, também necessitam de ácido pantotênico, tiamina e íons Mg₂. Levando essas características em consideração, meios sintéticos podem ser utilizados para o cultivo de F. tularensis.

O gênero Francisella pertence à classe Gammaproteobacteria, filo Proteobacteria. Este gênero também inclui F. novicida, cuja patogenicidade para humanos não foi estabelecida.

O agente causador da tularemia é um parasita intracelular. Sua virulência se deve a uma cápsula que inibe a fagocitose; à neuraminidase, que promove a adesão; à endotoxina; às propriedades alergênicas da parede celular, bem como à capacidade de se reproduzir em fagócitos e suprimir seu efeito destruidor. Os mecanismos de virulência ainda não foram decifrados. Além disso, receptores capazes de interagir com fragmentos Fc de imunoglobulinas IgG foram encontrados no bacilo da tularemia. Como resultado dessa ligação, a atividade dos sistemas do complemento e dos macrófagos é interrompida.

F. tularensis na forma S (virulento) possui dois antígenos: O e Vi (antígeno capsular). O antígeno O está relacionado aos antígenos de Brucella. A dissociação S->SR->R leva à perda da cápsula, da virulência e da imunogenicidade. A espécie F. tularensis é dividida em três raças geográficas (subespécies):

• Holártico (pouco patogênico para coelhos domésticos, não fermenta glicerol e não possui a enzima citrulina ureidase, encontrado em países do hemisfério norte);
• Ásia Central (pouco patogênica para coelhos, possui citrulina ureidase e fermenta glicerol);
• Nearctic (americano), mais patogênico para coelhos, fermenta glicerol, possui citrulina ureidase.

Além disso, cepas das subespécies americana e da Ásia Central têm atividade de fosfatase, que está ausente em cepas das subespécies holárticas.

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Resistência do agente causador da tularemia

F. tularensis é bastante estável no ambiente externo, especialmente se contido em material patológico. Em forragem, grãos, contaminados com excrementos de roedores doentes, sobrevive até 4 meses; na água - até 3 meses; no gelo - mais de 1 mês. É sensível à luz solar direta (morre em 30 minutos), altas temperaturas (a 60 °C morre em 10 minutos), sob a influência de solução de lisol a 3%, álcool a 50%, formalina e outros antissépticos, morre em 5 a 10 minutos.

Epidemiologia da tularemia

O principal reservatório da tularemia na natureza são os roedores, entre os quais se observam epizootias em condições naturais. Os humanos são infectados apenas por animais; o patógeno não é transmitido de pessoa para pessoa. O patógeno foi encontrado em 82 espécies de roedores e lagomorfos, sendo mais frequentemente encontrado em representantes de quatro famílias: roedores murinos (Muridae), lebres (Leporidae), esquilos (Sciuridae) e jerboas (Dipodidae). Na Rússia, os principais vetores são roedores murinos: ratos-d'água, ratazanas-comuns, camundongos domésticos e ratos-almiscarados.

De acordo com sua sensibilidade à tularemia, os animais podem ser divididos em quatro grupos:

• Grupo 1 - os mais suscetíveis (ratazanas, ratos-d'água, camundongos domésticos, camundongos brancos, porquinhos-da-índia e alguns outros). A dose letal mínima é de uma célula microbiana;
• 2º grupo - menos sensíveis (ratos cinzentos, esquilos, etc.). A dose letal mínima é de 1 bilhão de células microbianas, porém, uma célula microbiana é suficiente para infectar algumas delas;
• 3º grupo (predadores - gatos, raposas, furões). Resistente a altas doses infecciosas, a doença progride sem manifestações visíveis;
• Grupo 4 - imune à tularemia (ungulados, animais de sangue frio, aves).

Para humanos, a dose infecciosa mínima é uma célula microbiana. Humanos podem se infectar de todas as maneiras possíveis: contato direto e indireto com roedores doentes, seus cadáveres ou objetos infectados com roedores; via alimentar (pelo consumo de alimentos e água infectados com roedores), poeira transportada pelo ar e transmissão. A infecção pela bactéria tularemia foi estabelecida em 77 espécies de artrópodes hematófagos. De particular importância são os carrapatos ixodídeos, nos quais o patógeno persiste por toda a vida e é até mesmo transmitido transovarianamente para os descendentes. Essas circunstâncias contribuem para o estabelecimento da doença na natureza. Humanos se infectam com carrapatos não por picadas, mas como resultado do patógeno entrar em contato com a pele junto com os excrementos do carrapato.

Na Rússia, existem 7 principais tipos de paisagens de focos naturais de tularemia: pântano, campo de prado, estepe, floresta, riacho de sopé, tundra e tugai (deserto).

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Sintomas de tularemia

O agente causador da tularemia penetra no corpo através dos revestimentos externos (pele e mucosas danificadas e intactas). Úlceras frequentemente se formam no local da penetração. Através dos vasos linfáticos, as bactérias entram no linfonodo regional e se multiplicam livremente nele; o processo inflamatório leva à formação de um bubão. A partir daqui, o patógeno penetra no sangue, a bacteremia causa a generalização do processo, vários órgãos e tecidos estão envolvidos nele, a proliferação de bactérias nas quais leva à formação de granulomas e úlceras necróticas. A reestruturação alérgica do corpo está associada à bacteremia e à generalização. O período de incubação da tularemia varia de 2 a 8 dias. A doença começa agudamente: febre, dor de cabeça, dor muscular, hiperemia facial aparecem. O curso posterior depende do local da porta de entrada, de acordo com o qual as seguintes formas clínicas de tularemia são distinguidas: ulcerativo-glandular (bubônica), ocular-glandular, anginoso-glandular, abdominal e pulmonar. A mortalidade na tularemia não excede 1-2%.

A imunidade pós-infecciosa é forte, persistente, na maioria dos casos vitalícia, de natureza celular, causada principalmente por linfócitos T e macrófagos e, em menor grau, por anticorpos. A fagocitose em indivíduos com imunidade é completa.

Diagnóstico laboratorial da tularemia

Todos os métodos microbiológicos são utilizados para diagnosticar a tularemia. O estudo é realizado em laboratórios seguros. O material para o estudo – sangue, punção de bubão, raspado de úlcera, secreção conjuntival, placa faríngea, escarro, etc. – é determinado pela forma clínica da doença. Além disso, água e alimentos podem ser utilizados para o estudo. Em focos naturais de tularemia, são realizados estudos sistemáticos planejados para isolar o agente causador da tularemia em roedores.

O método bacteriológico para o diagnóstico de tularemia em humanos raramente apresenta resultados positivos. Uma cultura pura é geralmente isolada após a sua coleta em animais de laboratório suscetíveis. Camundongos brancos e porquinhos-da-índia são utilizados para bioensaios. Os camundongos são infectados por via subcutânea, os porquinhos-da-índia, por via intraperitoneal; os animais morrem no 3º ao 6º dia, às vezes após geadas. Os animais infectados são mantidos em condições especiais (como no diagnóstico de peste) e observados por 6 a 14 dias. Os animais experimentais não morrem por 7 a 15 dias, sendo abatidos no 15º ao 20º dia e os cadáveres são autopsiados. Na presença de tularemia, alterações patológicas e anatômicas são detectadas na forma de um processo produtivo com necrose. Uma cultura pura é isolada de órgãos internos em meio vitelínico, foco sanguíneo de glicose-cisteína, etc. A identificação é baseada na morfologia e nas propriedades tintoriais do patógeno, na ausência de crescimento em MPA e na aglutinação com soro homólogo. Patogenicidade para camundongos brancos e porquinhos-da-índia. Uma cultura pura pode ser isolada infectando embriões de galinha de 12 dias e o saco vitelínico. Para isolar uma cultura pura do patógeno da água, ela é centrifugada ou filtrada através de filtros bacterianos e o sedimento é usado para infectar animais de laboratório. No estudo de produtos alimentícios, estes são lavados com MP B, centrifugados e o sedimento é usado para infectar animais de laboratório.

Simultaneamente ao exame bacteriológico, são preparadas amostras de esfregaços a partir do material em estudo e coradas de acordo com Romanovsky-Giemsa. Em esfregaços de órgãos, podem ser detectadas pequenas bactérias cocoides e em forma de bastonete, localizadas intracelularmente e em aglomerados, formando uma cápsula delicada.

Para diagnóstico, são utilizadas uma reação de aglutinação detalhada, RPGA e RIF.

Testes alérgicos são utilizados para o diagnóstico precoce da tularemia (a partir do 5º dia após o início da doença). São utilizados dois tipos de tularina e, consequentemente, dois métodos de administração: cutâneo e intradérmico. Como a concentração do alérgeno em ambos os tipos de tularina é diferente, é inaceitável o uso de tularina cutânea para um teste intradérmico e vice-versa. Os resultados da reação alérgica são considerados dinamicamente após 24, 36 e 48 horas. Um infiltrado com diâmetro mínimo de 5 mm é considerado um resultado positivo. Em pessoas vacinadas ou que já tiveram tularemia, os testes alérgicos permanecem positivos por vários anos (reação anamnésica).

Prevenção específica da tularemia

Para prevenção específica, utiliza-se a vacina contra a tularemia, obtida em 1930 pelos médicos militares russos B. Ya. Elbert e N. A. Gaisky a partir da cepa Me 15. A vacina confere forte imunidade por 5 a 6 anos contra a infecção pelas subespécies europeia e holártica e é eficaz contra a variedade americana do patógeno. A vacinação é realizada de acordo com as indicações epidemiológicas, bem como para pessoas pertencentes a grupos de risco. É permitida a vacinação simultânea contra tularemia e brucelose; tularemia e peste, bem como contra tularemia e algumas outras infecções.

A prevenção não específica da tularemia é a mesma que para outras zoonoses e visa principalmente o controle de roedores.