Microscopia confocal

A microscopia confocal é agora considerada como um dos métodos mais prometedores de imagem da pele in vivo e, portanto, o interesse por ela tanto entre clínicos como entre representantes de institutos de pesquisa científica é excepcionalmente alto.

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Capacidades de microscopia confocal

Em dermatologia, o microscópio laser confocal é usado para:

• estudar a penetração de compostos na pele (vias de penetração, cinética, distribuição na pele);
• observação das glândulas (definição de estado ativo e passivo);
• estudos da cama microcirculatória (inclusive em tempo real);
• diagnóstico de neoplasias.

Sem discutir os méritos e deméritos das variedades de microscopia confocal acima mencionadas, observamos que, nos últimos anos, a microscopia confocal de fluorescência tem vindo a ganhar popularidade.

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Microscopia confocal para exame de pele

O microscópio confocal fornece duas oportunidades inestimáveis: estudo de tecidos no nível celular no estado da vida fisiológica e demonstração dos resultados do estudo (ou seja, atividade celular) em quatro dimensões - altura, largura, profundidade e tempo. Para a qualidade da imagem e a profundidade do estudo, o papel mais importante é desempenhado pela capacidade do tecido de transmitir luz, ou seja, sua transparência. O método de microscopia confocal é sem contato, o raio de luz não causa nenhum dano ou desconforto para o paciente ou animal experimental.

Para estudar a pele, utiliza-se a microscopia laser de varredura confocal (CSLM). O método permite que você veja a epiderme e a camada de derme papilar com uma resolução próxima à histológica. Todos os resultados da pesquisa são exibidos no monitor e salvos como um pacote de arquivos de imagem (na forma de um microfilme (em dinâmica) ou microfotografia).

Existem dois tipos de métodos:

• Reflexivo (CSLM de reflectância) - é baseado no fato de que várias estruturas intracelulares e intercelulares têm índice de refração da luz diferente, o que permite obter uma imagem de contraste.
• fluorescência (fluorescência CSLM) - usa luz laser que penetra na pele e excita nele exo ou endochromorfos que, em resposta, começam a emitir fótons (isto é, fluoresce).

A resolução lateral é a distância mínima entre pontos localizados no plano horizontal, isto é, um plano paralelo à superfície da pele. A resolução axial é a distância mínima entre pontos localizados em um plano perpendicular à superfície da pele.

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A história da microscopia confocal

A ideia de criar um microscópio capaz no nível celular para mostrar um corte intravital de tecido vivo foi desenvolvida ativamente há 130 anos. O principal elemento dos microscópios modernos foi projetado no final do século XIX e foi um disco rotativo com os orifícios mais pequenos localizados em espiral. Este disco foi inventado em 1883 por um estudante alemão Paul Nipkov, em homenagem ao qual recebeu seu nome - o disco Nipkov (ou o disco nipkov). A invenção baseou-se na capacidade da luz, passando pelos orifícios mais pequenos no disco e na lente de aumento, para penetrar na profundidade do tecido e iluminar o fragmento celular a uma distância da superfície. Quando o disco roda rapidamente, os fragmentos são adicionados à imagem geral. Ao remover ou aproximar a estrutura do objeto, a profundidade da seção óptica do tecido que está sendo examinado pode ser variada.

Somente com o advento dos VTRs na década de 1980 e computadores capazes de processar imagens, no início dos anos 90 houve uma oportunidade real para criar e efetivamente aplicar os microscópios modernos que são usados em nosso tempo.