Métodos imunológicos de diagnóstico de doenças hereditárias

Recentemente, o principal complexo de histocompatibilidade - HLA (Antígenos Leucocitários Humanos) passou a ser considerado um importante marcador imunológico da genética populacional. Os antígenos desse sistema são determinados imunologicamente em leucócitos sanguíneos. O complexo gênico HLA está compactamente localizado no braço curto do cromossomo 6 (6p21.3). A localização desse sistema e a extensão de seus loci no cromossomo nos permitiram calcular que o complexo constitui aproximadamente 1/1000 do pool gênico do organismo. Os antígenos de histocompatibilidade participam da regulação da resposta imune do organismo, na manutenção da homeostase imunológica. Devido ao seu polimorfismo e à localização compacta dos antígenos HLA, eles adquiriram grande importância como marcador genético.

Atualmente, mais de 200 alelos desse sistema foram descobertos; ele é o mais polimórfico e biologicamente significativo dos sistemas genéticos do corpo humano. Distúrbios de várias funções do complexo principal de histocompatibilidade contribuem para o desenvolvimento de diversas doenças, principalmente autoimunes, oncológicas e infecciosas.

De acordo com a localização do complexo HLA no cromossomo 6, os seguintes loci são distinguidos: D/DR, B, C, A. Novos loci G, E, H, F foram descobertos relativamente recentemente; seu papel biológico está sendo ativamente estudado atualmente. Três classes de antígenos são distinguidas no complexo principal de histocompatibilidade. Antígenos de classe I são codificados pelos loci A, B, C. Novos loci também pertencem a esta classe. Antígenos de classe II são codificados pelos loci DR, DP, DQ, DN, DO. Genes de classes I e II codificam antígenos de transplante. Genes de classe III codificam componentes do complemento (C2, C4a, C4b, Bf), bem como a síntese de isoformas de uma série de enzimas (fosfoglucomutase, glicoxilase, pepsinogênio-5, 21-hidroxilase).

A presença de Ag associado a uma determinada doença em uma pessoa nos permite supor uma maior predisposição a essa patologia e, em algumas correlações, ao contrário, resistência a ela.

A determinação de antígenos do sistema HLA é realizada em linfócitos isolados do sangue periférico usando soros de histotipagem em uma reação de microlinfocitotoxicidade ou métodos de genética molecular.

Estabelecer ligações associativas entre doenças e o antígeno do complexo principal de histocompatibilidade permite:

• identificar grupos com maior risco de desenvolver a doença;
• determinar seu polimorfismo, ou seja, identificar grupos de pacientes com características do curso ou patogênese da doença; nesse sentido, pode-se realizar uma análise da sintropia das doenças, identificando os pré-requisitos genéticos para a combinação de diversas formas de patologia; a associação com antígenos que determinam resistência às doenças permite identificar indivíduos com risco reduzido de desenvolver essa patologia;
• realizar diagnósticos diferenciais de doenças;
• determinar o prognóstico;
• desenvolver táticas de tratamento ideais.

Como a maioria das doenças não tem relação direta com os antígenos do complexo principal de histocompatibilidade, a teoria dos "dois genes" foi proposta para explicar a associação entre doenças e antígenos HLA. De acordo com essa teoria, existe um gene(s) de resposta imune (gene Ir) intimamente associado aos antígenos HLA e aos genes que regulam a resposta imune. Genes protetores determinam a resistência a doenças, e genes provocadores determinam a sensibilidade a certas doenças.

O risco relativo da doença para indivíduos com o genótipo correspondente é calculado usando a fórmula: x = [h _p × (1 - h _c )] / [h _c × (1 - h _p )], onde h _p é a frequência da característica em pacientes e h _c é a frequência em indivíduos no grupo de controle.

O risco relativo mostra a magnitude da associação da doença com um determinado Ag/Ag do sistema HLA (dá uma ideia de quantas vezes maior é o risco de desenvolver a doença na presença de Ag em comparação com a sua ausência). Quanto maior este indicador em um paciente, maior a associação com a doença.

Associação de doenças humanas com HLA-Ag (frequência genética,%)

Doenças	HLA	Grupo de controle, %	Doente,%	Risco relativo
Reumatologia
Espondilite anquilosante	B27	5-7	90-93	90-150
Síndrome de Reiter	B27	6-9	69-76	32-49,6
Artrite causada por infecções:
- Yersinia	B27		58-76	17,59
- Salmonela	B27		60-69	17,57
Artrite psoriática	B13		9-37	4,79
Artrite reumatoide	Dw4	12-19	48-72	3,9-12,0
	DR4	20-32	70	4,9-9,33
Síndrome de Behçet	B5	13	48-86	7,4-16,4
SKV	B5		11-34	1,83
	B8		19-48	2.11
	Bw15	6-10	21-40	5.1
	DR2	26,4	57,1	3,80
	DR3	22.2	46,4	2,90
Síndrome de Gougerot-Sjögren	B8		38-58	3.15
	Dw3	26	69-87	19.0
Cardiologia
DIC	B7	27,8	45,8	2.19
	B14	7,5	14,8	2.14
	B15	11.1	20.4	2,05
	Cw4	18,7	32,8	2.12
Hipertensão	B18	10.4	22,6	2,52
	Aw19	12.6	28.3	2,74
Endocrinologia
Diabetes tipo 1	B8	32	52-55	2,1-2,5
	B18		5-59	1,65
	B15	12	18-36	1,89-3,9
	Dw3	26	48-50	2,9-3,8
	Dw4	19	42-49	3,5-3,9
	DR3 DR3/DR4	20	60	6.10 33
Hipertireoidismo	B8	21	35-49	2,34-3,5
	D3	26	61	4.4
	DR3	20	51	4.16
Tireoidite subaguda (de Quervain)	Bw35	13	63-73	16,81
	Dw1		33	2.1
Doença de Addison	B8		20-80	3,88-6,4
	Dw3	26	70-76	8,8-10,5
Síndrome de Itsenko-Cushing	A1		49	2,45
Gastroenterologia
Anemia perniciosa	B7	19	26-52	1,7-3,1
	DR5	6	25	5.20
Gastrite atrófica	B7		37	2,55
Úlcera péptica do duodeno	A2	48.1	61,3	1.7
	A10	20.6	63,3	6,65
	B14	4.0	10.3	2,76
	B15	6.6	24,4	4,56
	B40	9,72	23.3	2,82
Hepatite autoimune	B8	16	37-68	2,8-4,1
	DR4	24	71	7,75
Portadores de HBsAg	Bw41		12	11.16
	B15		10-19	0,29

Doenças	HLA	Grupo de controle, %	Doente,%	Risco relativo
Dermatologia
Psoríase	Bw17	6-8	22-36	3,8-6,4
	B13	3-5	15-27	4.2-5.3
	Bw16	5	15	2.9
Dermatite herpetiforme	B8	27-29	62-63	4,00-4,6
	DR3	19	80	16,60
Esclerodermia	B7	24	35	1.7
Pênfigo	A10			3.1
Dermatite atópica	B13	6,86	21,28	3,67
	B27	9,94	25,53	3.11
	A10/B13	0,88	8,51	10,48
Eczema	A10	19,64	36,67	2,37
	B27	9,94	26,67	3.29
Urticária e edema de Quincke	B13	6,86	21,21	3,65
	B5.8	1,42	12,12	9,57
	B5.35	0,71	6.06	9.02
Neurologia
Esclerose múltipla	A3	25	36-37	2,7-2,8
	B7	25-33	36-42	1,4-2,0
	Dw2	16-26	60-70	4.3-12.2
	DR2	35	51,2	1,95
	DR3	20	32,5	1,93
Miastenia	B8	21-24	52-57	3,4-5,0
	A1	20-25	23-56	3.8
	DR3	26	50	2,5
Pneumologia
Asma brônquica (em pacientes de 19 a 30 anos)	B21	4,62	12,5	2,95
	B22	9,94	19,64	2.22
	B27	12h31	37,5	4.27
	B35	0,11	5.36	51,4
	B27/35	0,47	7.14	16.2
Outras doenças
Rinite vasomotora	A3	26,98	52,38	2,98
	B17	7,57	28,57	4,88
	A3/10	2,72	23,83	11.18
	B7/17	0,47	9,52	22.28

Os dados apresentados na tabela mostram que os vínculos associativos mais fortes são encontrados para doenças com herança do tipo poligênica ou multifatorial.

Assim, a determinação de antígenos do complexo principal de histocompatibilidade em células sanguíneas (leucócitos) permite identificar o grau de predisposição individual de uma pessoa a uma determinada doença e, em alguns casos, utilizar os resultados da pesquisa para diagnóstico diferencial, avaliação do prognóstico e seleção de táticas de tratamento. Por exemplo, a detecção de antígenos HLA-B27 é utilizada no diagnóstico diferencial de doenças autoimunes. É detectado em 90-93% dos pacientes caucasianos com espondilite anquilosante e síndrome de Reiter. Em representantes saudáveis dessa raça, os antígenos HLA-B27 são detectados em apenas 5-7% dos casos. Os antígenos HLA-B27 são frequentemente detectados na artrite psoriática, doenças inflamatórias intestinais crônicas que ocorrem com sacroileíte e espondilite, uveíte e artrite reativa.

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