Cariotipagem

Hemoculturas de curto prazo, células da medula óssea e culturas de fibroblastos são mais frequentemente usadas para estudar cromossomos. O sangue com um anticoagulante entregue ao laboratório é centrifugado para sedimentar os eritrócitos, e os leucócitos são incubados em um meio de cultura por 2 a 3 dias. A fitohemaglutinina é adicionada à amostra de sangue, pois acelera a aglutinação dos eritrócitos e estimula a divisão dos linfócitos. A fase mais adequada para o estudo dos cromossomos é a metáfase da mitose, portanto, a colchicina é usada para interromper a divisão dos linfócitos nesse estágio. A adição desse fármaco à cultura leva a um aumento na proporção de células em metáfase, ou seja, no estágio do ciclo celular em que os cromossomos são mais visíveis. Cada cromossomo se replica (produz sua própria cópia) e, após a coloração apropriada, é visível como duas cromátides ligadas ao centrômero, ou constrição central. As células são então tratadas com uma solução hipotônica de cloreto de sódio, fixadas e coradas.

Para a coloração dos cromossomos, o corante Romanovsky-Giemsa, 2% de acetocarmina ou 2% de acetato...

Para obter uma imagem detalhada da estrutura cromossômica e identificar (definir) cromossomos individuais ou seus segmentos, são utilizados diversos métodos de coloração diferencial. Os métodos mais comumente utilizados são Giemsa, bem como bandas G e Q. Ao examinar a preparação microscópica ao longo do cromossomo, são reveladas várias bandas coradas (heterocromatina) e não coradas (eucromatina). A natureza da estriação transversal obtida dessa forma permite a identificação de cada cromossomo no conjunto, uma vez que a alternância de bandas e seus tamanhos são estritamente individuais e constantes para cada par.

As placas metafásicas de células individuais são fotografadas. Cromossomos individuais são recortados das fotografias e colados em ordem em uma folha de papel; essa imagem dos cromossomos é chamada de cariótipo.

O uso de colorações adicionais, bem como novos métodos para obtenção de preparações cromossômicas que permitem que os cromossomos sejam esticados em comprimento, aumentam significativamente a precisão do diagnóstico citogenético.

Uma nomenclatura especial foi desenvolvida para descrever o cariótipo humano. O cariótipo normal de um homem e uma mulher é designado como 46, XY e 46, XX, respectivamente. Na síndrome de Down, caracterizada pela presença de um cromossomo 21 adicional (trissomia 21), o cariótipo de uma mulher é descrito como 47, XX 21+, e o de um homem é 47, XY, 21+. Na presença de uma anomalia estrutural do cromossomo, é necessário indicar o braço longo ou curto alterado: a letra p denota o braço curto, q denota o braço longo e t denota a translocação. Assim, no caso de deleção do braço curto do cromossomo 5 (síndrome do cri du chat), o cariótipo feminino é descrito como 46, XX, 5p-. A mãe de uma criança com síndrome de Down por translocação, portadora da translocação balanceada 14/21, tem cariótipo 45, XX, t(14q; 21q). O cromossomo de translocação é formado pela fusão dos braços longos dos cromossomos 14 e 21, e os braços curtos são perdidos.

Cada braço é dividido em regiões, que por sua vez são divididas em segmentos, ambos designados por algarismos arábicos. O centrômero do cromossomo é o ponto de partida para a contagem de regiões e segmentos.

Assim, quatro rótulos são usados para a topografia cromossômica: número do cromossomo, símbolo do braço, número da região e número do segmento dentro da região. Por exemplo, a entrada 6p21.3 significa que estamos falando do cromossomo 6 do 6º par, seu braço curto, região 21, segmento 3. Há também símbolos adicionais, em particular pter - a extremidade do braço curto, qter - a extremidade do braço longo.

O método citogenético de pesquisa permite a detecção de deleções e outras alterações em cromossomos de apenas aproximadamente 1 milhão de bases (nucleotídeos) de tamanho.

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